tRNAプロセシング酵素RNase Pのサブユニット間相互作用に関する研究

tRNA加工酶RNase P亚基间相互作用的研究

• 批准号: 07J09329
• 负责人: 木房 まゆみ
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J09329/
• 关键词: リボヌクレアーゼP; tRNAプロセシング; リボザイム; タンパク質間相互作用; Two-hybridシステム; RNase P; Pyrococcus horikoshii; protein-protein interaction; Two-hybrid system

リボヌクレアーゼP(RNase P)は、前駆体tRNAの5'リーダー配列のプロセシングに関与するエンドヌクレアーゼである。超好熱古細菌Pyrococcus horikoshii由来RNase Pは、触媒活性を持つ1分子のRNA(PhopRNA)と5種のタンパク質(PhoPop5、PhoRpp21、PhoRpp29、PhoRpp30、PhoRpp38)から構成され、4種のタンパク質(PhoPop5、PhoRpp21、PhoRpp29、PhoRpp30)はPhopRNAの分子シャペロンとして機能し、PhoRpp38はPhopRNAと特異的に相互作用してその耐熱性に関与していることが明らかになっている。本研究では、5種のタンパク質の相互作用について分析するとともに、タンパク質PhoRpp38とPhopRNAの相互作用について検討した。まず、各タンパク質の相互作用を酵母Two-hybridシステムにより検討した結果、PhoPop5とPhoRpp30およびPhoRpp21とPhoRpp29が強く相互作用し、PhoPop5とPhoRpp21が弱く相互作用していることが解った。さらに、RNase Pの熱耐性に関与しているタンパク質PhoRpp38は、いずれのタンパク質とも相互作用していないことが示唆された。以上の結果より、2種のタンパク質複合体(PhoRpp30-PhoPop5)と(PhoRpp21-PhoRpp29)がPhoPop5とPhoRpp21の弱い相互作用により、複合体(PhoRpp30-PhoPop5-PhoRpp21-PhoRpp29)を形成していることが示唆された。次に、PhopRNAのPhoRpp38結合部位をフットプリンティング法を用いて検討した。まず、PhoRpp38の存在下および非存在下でPhopRNAをジメチル硫酸で修飾後、PhopRNAの修飾塩基をプライマー伸長反応により同定した。その結果、PhopRNAのC^<190>、A^<227>、A^<228>、A^<234>、C^<243>、A^<245>、A^<261>、A^<272>がPhoRpp38の存在下でジメチル硫酸による修飾から保護されることが解った。この結果とSELEX法を用いたPhoRpp38と特異的に結合するアプタマーの塩基配列を考慮して、PhoRpp38はPhopRNAのヘリックスP12-1とP12-2およびヘリックスP15の2箇所に結合することにより、PhopRNAの耐熱性の上昇に寄与していることが示唆された。

The RNase P(RNase P) is a 5'-variant of the precursor tRNA. Pyrococcus horikoshii is a super-hot archaea derived from RNase P, catalytic activity, RNA(PhopRNA) and 5 species of RNA.(PhoPop5, PhoRpp21, PhoRpp29, PhoRpp30, PhoRpp38)(PhoPop5, PhoRpp21, PhoRpp29, PhoRpp30) PhoRpp38 PhoRpp39 PhoRpp38 PhoRpp39 PhoRpp30 PhoRpp38 PhoRpp39 PhoRpp38 PhoRpp38 PhoRpp39 PhoRpp39 PhoRpp38 PhoRpp39 PhoRpp39 PhoRpp30 PhoRpp38 PhoRpp39 PhoRpp38 PhoRpp39 PhoRpp39 PhoRpp38 PhoRpp39 PhoRpp39 PhoR In this study, we analyzed the interaction between five kinds of molecules and PhoRpp38, and discussed the interaction between PhoRpp38 and PhoRpp38. PhoPop 5 and PhoRpp30 and PhoRpp21 and PhoRpp29 have strong interactions, PhoPop5 and PhoRpp 21 have weak interactions, and PhoPop5 and PhoRpp21 have weak interactions. The heat resistance of RNase P is related to the heat resistance of RNase P, and the heat resistance of RNase P is related to the heat resistance of RNase P. As a result, two kinds of PhoRpp complexes (PhoRpp30-PhoPop5) and (PhoRpp21-PhoRpp29) were formed by the weak interaction between PhoPop 5 and PhoRpp21. PhiopRNA Rpp38 binding site was studied by using the photonics method. In the presence or absence of PhoRpp38, PhoRpp38 is modified by sulfuric acid, and PhoRpp38 is modified by sulfuric acid. The results showed that C^<190>, A^<227>, A <228>^<234>, C^<243>, A <245>^, <261>A^<272>and PhoRpp38 could be used to modify the protein. The results showed that PhoRpp38 could bind to P12-1, P12-2 and P15 in two regions of P12-1, P12-2 and P15 in two regions of P12-1, P12-2 and P15 in two regions of P12-1.