PSK受容体をモデルとしたLRR型受容体におけるリガンド-受容体相互作用の解析

1.植物LRR型受容体のうちLRR XIファミリーに属するすべての受容体キナーゼ28種類について細胞外領域をタグ融合タンパク質として発現させ,LRR型受容体のライブラリー化を行った.この受容体ライブラリーの応用例として,共同研究によりLRR XIに含まれる受容体であるTDRと仮道管分化阻害因子である分泌型ペプチドTDIF(CLE41/44)との直接的結合を,光親和性CLE41/44を用いたフォトアフィニティーラベル実験により証明し,LRR型受容体における新たなリガンドー受容体ペアの同定に貢献した.2.受容体ライブラリーを作製したLRR XI中のCLV1のホモログであるBAM1,BAM2およびBAM3のリガンド探索を行った.CLV1のリガンドであるCLV3ホモログであるCLEペプチド26種類を系統樹的に7つのサブファミリーに分類し,ファミリーを代表した7つのCLEペプチドについて,光親和性CLEペプチドを化学合成してフォトアフィニティーラベルを行った.その結果BAMに最も強い結合が確認されたCLE9ペプチドについて放射性標識体[^3H]CLE9を作製し,タグを介してビーズに固相固定化したBAMとの詳細な結合解析を行った結果,すべてのBAMはCLE9ペプチドを高いアフィニティーを持って結合することが示され,CLE9がBAMのリガンドであることが強く示唆された.さらに他のCLEペプチドを競合剤として用いた競合的結合解析を行ったところ,BAMは複数のCLEペプチドを結合することを見出した.LRR型受容体のライブラリーを用いることで新たなリガンドー受容体ペア2例の同定に貢献ことができ,今後もリガンド未同定のLRR XIについてリガンド探索を続けていく予定である.

1.植物LRR型受容体のうちLRR XIファミリーに属するすべての受容体キナーゼ28種類について細胞外領域をタグ融合タンパク質として発現させ,LRR型受容体のライブラリー化を行った.この受容体ライブラリーの応用例として,共同研究によりLRR XIに含まれる受容体であるTDRと仮道管分化阻害因子である分泌型ペプチドTDIF(CLE41/44)との直接的結合を,光親和性CLE41/44を用いたフォトアフィニティーラベル実験により証明し,LRR型受容体における新たなリガンドー受容体ペアの同定に貢献した.2.受容体ライブラリーを作製したLRR XI中のCLV1のホモログであるBAM1,BAM2およびBAM3のリガンド探索を行った.CLV1のリガンドであるCLV3ホモログであるCLEペプチド26種類を系統樹的に7つのサブファミリーに分類し,ファミリーを代表した7つのCLEペプチドについて,光親和性CLEペプチドを化学合成してフォトアフィニティーラベルを行った.その結果BAMに最も強い結合が確認されたCLE9ペプチドについて放射性標識体[^3H]CLE9を作製し,タグを介してビーズに固相固定化したBAMとの詳細な結合解析を行った結果,すべてのBAMはCLE9ペプチドを高いアフィニティーを持って結合することが示され,CLE9がBAMのリガンドであることが強く示唆された.さらに他のCLEペプチドを競合剤として用いた競合的結合解析を行ったところ,BAMは複数のCLEペプチドを結合することを見出した.LRR型受容体のライブラリーを用いることで新たなリガンドー受容体ペア2例の同定に貢献ことができ,今後もリガンド未同定のLRR XIについてリガンド探索を続けていく予定である.