The improvement of microinsemination techniques and the production of transgenic offspring with GS cell-derived spermatids in the rats

显微授精技术的改进及GS细胞来源的大鼠精子细胞产生转基因后代

• 批准号: 19300150
• 负责人: HIRABAYASHI Masumi
• 金额: $ 6.74万
• 依托单位: National Institute for Physiological Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19300150/
• 关键词: ラット; 蛍光タンパク質遺伝子; 精子幹細胞; 人為的活性化; 円形精子細胞; 胚性幹細胞; 精細管移植; キメラ; トランスジェニック; FGFレセプターインヒビター; MEK活性化インヒビター; GSK3インヒビター; LIF; レンチウイルス; レトロウイルス; 異種間移植; 精子; 第二減数分裂後期; イオノマイシン; 体内受精; DNAメチル化

The ultimate aim of this study is to establish reproductive technology for production of knock-out rats, by improving microinsemination techniques and producing rat offspring via transfected germ stem cells (GSCs) and embryonic stem cells (ESCs). As the primary result obtained, transgenic rats expressing GFP gene were successfully produced, when the established GSCs were subjected to lentiviral transfection and round spermatid injection. Transgenic rats expressing Kusabira-Orange gene were also produced via blastocyst injection of ESCs established and transfected by electroporation. It was shown for the first time that the GSCs and ESCs can contribute to the production of transgenic offspring in the rats.

本研究的最终目的是通过改进显微授精技术并通过转染的生殖干细胞（GSC）和胚胎干细胞（ESC）产生大鼠后代，建立用于产生基因敲除大鼠的生殖技术。初步结果是，将建立的GSCs进行慢病毒转染和圆形精子细胞注射，成功产生了表达GFP基因的转基因大鼠。表达 Kusabira-Orange 基因的转基因大鼠也通过囊胚注射电穿孔建立和转染的 ESC 来产生。首次证明 GSC 和 ESC 有助于大鼠转基因后代的产生。

项目成果

ラットICSI系で作製した前核期卵における染色体異常の誘発要因について

诱导大鼠 ICSI 系统产生的原核期卵染色体异常的因素

• 发表时间: 2007
• 作者: 矢部光保;河野正男;八木裕之;斎尾浩一郎;Eimei Sato;Eimei Sato;Eimei Sato;Eimei Sato;Eimei Sato;佐藤英明;佐藤英明;佐藤英明;佐藤英明;佐藤英明;佐藤英明;佐藤英明;佐藤英明;佐藤英明;Hochi S;Hirabayashi M;Hirabayashi M;Hirabayashi M.;Iwanami Y.;Kaneko R.;金子 涼輔;保地 眞一
• 通讯作者: 保地 眞一

Factors affecting full-term development of rat oocytes microinjected with fresh or crvonreserved round snermatids

新鲜或保存的圆形小蛇显微注射大鼠卵母细胞足月发育的影响因素

• 发表时间: 2008
• 期刊: Exp. Anim. 57(印刷中)
• 作者: 上田悦弘;近江雅人;春名正光;上田悦弘;Hirabayashi M
• 通讯作者: Hirabayashi M

Derivation of rat cell line which differentiate into visceral yolk sac in vivo.

体内分化为内脏卵黄囊的大鼠细胞系的衍生。

• 发表时间: 2009
• 作者: Takada T;他
• 通讯作者: 他

体内受精、体外受精、および顕微授精に由来するラット前核期卵のDNA脱メチル化動態.

体内受精、体外受精和显微授精产生的大鼠原核期卵子的 DNA 去甲基化动态。

• 发表时间: 2008
• 作者: 吉沢雄介;他
• 通讯作者: 他

Chapter-9.Generation of transgenic rats by ooplasmic injection of sperm cells exposed to exogenous DNA."Rat genomics : Methods and Protocols"(Eds.I Anegon)

第 9 章.通过卵质注射暴露于外源 DNA 的精子细胞产生转基因大鼠。“大鼠基因组学：方法和方案”(Eds.I Anegon)

• 发表时间: 2010
• 作者: T.Masumura;山本希美子;et al.;桑原光巨;Hirabayashi M
• 通讯作者: Hirabayashi M