Evaluation of GPR48 as a novel molecular target which is involved in the tumor progression

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細胞浸潤能変化invasion assayによりGPR48発現量に正相関した浸潤能の亢進が細胞レベルで認められていたため、そのメカニズムを探るため、細胞運動能の変化をscratch assayで調べた。使用した恒常発現株のGPR48発現量は株間で様々であったが、運動能との相関性は見出せなかった。さらに浸潤能亢進レベルも対照群と有為差が認められなくなった。このため、細胞外マトリックス分解能などの測定も計画していたが中止とした。発癌促進効果GPR48遺伝子を導入した培養細胞でcolony formation assayとfocus assayを行い、GPR48発現亢進による発癌性への寄与を検討したが、発癌促進効果は認められなかった。しかし細胞レベルでの研究から、GPR48は癌の悪性度を促進する作用を示した。GPR48トランスジェニックマウスの解析全身性発現型トランスジェニックマウスの作成に成功し、外来性GPR48発現臓器の異なる3ラインを得た。個体レベルでの機能解析は、ノックアウトマウスにおいて発育不全や腎臓形成不全が認められているが、全身性発現型GPR48トランスジェニックマウスでは発育程度、腎形成の異常は出現せず、長期通常飼育下で癌その他の疾患の発生の傾向は認められなかった。我々はこれまでの他の研究プロジェクトにより、p27のユビキチンプロテアソームシステムによる分解の基質認識タンパクであるSkp2ホモノックアウトマウスは、尿管結紮による腎不全モデル(UUO マウス)を作成すると腎障害レベルがヘテロまたはホモ野生型と比較して著明に軽減されていることを見出していた。このような表現系の発現に、Skp2によるp27分解の抑制、さらにGPR48発現量の上昇が関与している可能性を考え、GPR48トランスジェニックマウスでUUOを作成して組織学的に解析した。その結果、腎障害の程度はコントロールUUOマウスと同等であり、Skp2ノックアウトマウスで見られた腎の特徴はGPR48を介してはいないと考えられた。これらのマウスを用いた結果から、GPR48はp27の下流因子の一つではあるものの、腎障害および発癌の過程においてGPR48がp27下流の主経路に関与している可能性は低いと思われた。