非閉塞性胆汁うっ滞病変の機序解明と高圧酸素療法による改善効果

非梗阻性胆汁淤积性病变的机制阐明及高压氧治疗的改善效果

• 批准号: 19791331
• 负责人: 大島 秀紀
• 金额: $ 0.74万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19791331/
• 关键词: 細胞・組織; 発現制御; 胆汁うっ滞; 高圧酸素療法

ラット小型肝細胞を用いた,病態解析モデルの確立<方法>(1)成熟ラット肝よりコラゲナーゼ潅流法により小型肝細胞を分離,培養を行いin vitroで類肝組織を構築した。(2)細胞膜トランスポーター(Oatpt,Ntcp,Mrpt,Mdr,Bsep,Bcrp)の遺伝子発現をRT-PCR法で定量化し,さらにそれらトランスポーター蛋白の細胞膜上への局在を免疫染色法で検討を行った。肝細胞トランスポーターの発現には,どのような核内転写因子(HNFt、C/EBPなど)あるいは,ホルモンレセプター(CAR,PXR,RXRなど)が関与し制御しているかをRT-PCR法によりその遺伝子発現の変化から検討した。(3)トランスポーターの安定発現した類肝組織において肝細胞におけるRI基質(Ettoron Sulfate,Estradiol glucronideなど)の細胞内への取り込み,細胞外への排泄を測定することにより輸送能を定量化し,in vitroにおける基質(胆汁)輸送を検討した。<結果>(1)小型肝細胞コロニカの経時的変化:肝細胞培養初期は,小型の実質細胞からなるコロニーを形成した。培養12日目に再播種後,細胞は成熟化し三次元構造をとり細胞間には毛細胆管構造を形成するようになった。(2)小型肝細胞成熟化に伴う肝細胞膜トランスポーターの発現:類洞側細胞膜上に発現する取り込み型有機アニオントランスポーター(Oatp1/2/4),毛細胆管側細胞膜上に発現する排泄型有機アニオントランスポーター(Mrp2)は,成熟肝細胞と比較し発現は低いが,成熟化するに従いその発現量は上昇した。また,これらの発現上昇には肝転写因子HNF4,ホルモンレセプターCARとの関連が示された。(3)小型肝細胞内への有機アニオン基質の取り込み,排泄:培養液中に投与された,Estoron Sulfateの細胞内への取り込み,およびEstradiol glucronideの毛細胆管への排泄は,培養日数が増し細胞が成熟化するに従い増加した。<考察>小型肝細胞の有機アニオントランスポーターの発現,有機アニオン輸送形態はin vitroにおける胆汁うっ滞病変解析モデルとして有用と考えられた。

(1) Mature small hepatocytes were isolated and cultured in vitro to construct liver-like tissues. (2)Cell membrane protein (Oatpt,Ntcp,Mrpt,Mdr,Bsep,Bcrp) gene expression was quantified by RT-PCR and examined by immunostaining. In the development of liver cells, nuclear transcription factors (HNFt, C/EBP) are closely related to the control of liver cell transcription factors (CAR,PXR,RXR). (3)The stability and development of Rl in hepatoid tissues were studied. The intracellular transport of Rl matrix (Ettoron Sulfate,Estradiol glucronide) in hepatocytes was quantified. The extracellular excretion of Rl matrix was measured. The matrix (bile) transport in vitro was discussed. <Results>(1) Transformation of small hepatocytes during hepatocyte culture: In the early stage of hepatocyte culture, small hepatocytes were formed during hepatocyte culture. After 12 days of culture and re-seeding, the cells matured and the three-dimensional structure was formed. (2)The maturation of small hepatocytes is accompanied by the development of hepatocyte membrane transition: the development of small organic transition (Oatp1/2/4) on the cell membrane of the cavity side, and the development of excretory organic transition (Mrp2) on the cell membrane of the capillary duct side. The development of mature hepatocytes is relatively low, and the development of mature hepatocytes is relatively high. The correlation between the occurrence of this phenomenon and the expression factor HNF4 is shown. (3)Extraction and excretion of organic matrix in small hepatocytes: Estoron Sulfate was injected into culture medium, and the intracellular concentration of Estoron sulfate was detected. The excretion of Estradiol glucronide in bile capillaries was detected. The number of days of culture increased, and the cell maturation increased. <Investigation> The development of small liver cells, the transport morphology of small liver cells in vitro, the analysis of bile retention disease, and the study of useful liver cells.

项目成果

Functional Expression of Organic Anion Transporters in Hepatic Organoids Reconstructed by Rat Small Hepatocytes

• DOI: 10.1002/jcb.21601
• 发表时间: 2008-05-01
• 期刊: JOURNAL OF CELLULAR BIOCHEMISTRY
• 影响因子: 4
• 作者: Oshima, Hideki;Kon, Junko;Mitaka, Toshihiro
• 通讯作者: Mitaka, Toshihiro

組織因子(TF)

组织因子（TF）

• 发表时间: 2007
• 期刊: Surgery Frontier 14
• 作者: 岡本基良;田中真;ゴンザレスアルバパトリシア;井出文雄;坂下英明;田中章夫;岡本基良;Oshima H.;大島 秀紀;趙恩樺;大島 秀紀
• 通讯作者: 大島 秀紀

幽門側胃切除・空腸嚢間置再建術

远端胃切除术和空肠储袋介入重建

• 发表时间: 2007
• 期刊: 手術 61
• 作者: Akio TANAKA;Motoyoshi OKAMOTO;Dai YOSHIZAWA;Shigeru ITO;Patricia GONZALEZ ALVA;Fumio IDE;Kaoru KUSAMA;大島 秀紀
• 通讯作者: 大島 秀紀

Small hepatocyte-like progenitor cell (SHPC).

小肝细胞样祖细胞（SHPC）。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Surgery Frontier 14
• 作者: Fujiwara;T.;佐々木秀文 (Hidefumi Sasaki);別府 透;大島秀紀
• 通讯作者: 大島秀紀

ラット肝前駆細胞small hepatocye-like progenitor cellにおける分化、再生機序の検討

大鼠肝脏祖细胞（小肝细胞样祖细胞）分化和再生机制的检查

• 发表时间: 2008
• 作者: Tokuhara;T.;Hirai;T.;Miyake;M;大島秀紀
• 通讯作者: 大島秀紀