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神経特異的ＲＮＡ結合蛋白質Ｅｌａｖｌ２による脳内ＲＮＡ制御の意義の解明

阐明神经元特异性 RNA 结合蛋白 Elavl2 对脑 RNA 调节的重要性

基本信息

批准号：
15J07434
负责人：
大塚貴文
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-24 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J07434/
关键词：
RNA結合タンパク質翻訳制御神経細胞

项目摘要

まず、Elavl2タンパク質の脳内発現パターンを確認する為、マウス脳のスライス切片を用いた組織学的解析を行った。その結果、海馬CA3領域の錐体細胞および海馬歯状回門に存在するParvalbumin陽性神経細胞において、Elavl2タンパク質の発現を見出した。さらに、海馬神経細胞に神経活動を誘導したところ、誘導後3時間でElavl2タンパク質が急速に減少するという知見を得た。これは、Elavl2タンパク質が神経活動依存的に制御されていることを強く示唆すると同時に、Elavl2が制御する種々の標的RNAも神経活動に依存した制御を受けることを示唆している。以上までの結果をまとめ学術誌に報告した。次に、Elavl2特異的抗体を用いたHITS-CLIP解析を行い、Elavl2新規標的RNAを800種類以上同定した。Elavl2標的配列の大部分はmRNAの3’非翻訳領域であることから、Elavl2の主要な機能として、標的mRNAの安定化もしくは翻訳促進を担うことが強く示唆された。同様に、Elavl2のコンセンサス結合配列も同定した。さらに、マウス脳を用いたリボソームプロファイリング法の構築を行い、野生型およびElavl2ノックアウトマウス脳における翻訳効率の比較を行ったところ、ノックアウトマウス脳においてElavl2標的mRNAの翻訳効率が有意に減少することを見出した。ウェスタンブロット解析により、神経伝達やシナプス形成に関わる受容体分子のタンパク質量が、Elavl2ノックアウトマウス脳内で減少することを確認した。以上の新規知見より、Elavl2が生体脳内において標的RNAの翻訳を促進していることが極めて強く示唆された。現在、Elavl2の強制発現系による標的RNA翻訳促進の確認を行っており、それらをまとめた論文を執筆中である。

Elavl2: The quality of the tissue was determined by histological analysis. The results showed that pyramidal cells in hippocampal CA3 domain and hippocampal dentate gyrus existed, Parvalbumin positive neurons existed, and Elavl2 protein appeared. In addition, hippocampal neurons were induced to decrease their activity rapidly 3 days after induction. Elavl2 is a gene that is dependent on the activity of the target RNA and is dependent on the activity of the target RNA The above results are reported in academic journals. Next, Elavl2 specific antibodies were used in HITS-CLIP analysis, and Elavl2 new target RNA was used in more than 800 types. Most of Elavl2 target sequences are in the 3 'non-inverted domain of mRNA, and the main functions of Elavl2 are to stabilize the target mRNA and promote its inversion. The same as Elavl2, Elavl2, Elav A comparison of the translation efficiency between wild-type and Elavl2 target mRNA was made. The results showed that the translation efficiency of Elavl2 target mRNA was intentionally reduced. It is confirmed that the mass of the receptor molecule is related to the formation of the receptor molecule. The above new knowledge, Elavl2, promotes the translation of target RNA in vivo. Now, Elavl2 stress development system target RNA translation promotion confirmation, the paper was written.