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フォトアフィニティーラベリング法を用いた天然物ＯＳＷ－１結合タンパク質の同定

光亲和标记法鉴定天然产物OSW-1结合蛋白

基本信息

批准号：
15J08917
负责人：
山田里佳
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-24 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J08917/
关键词：
天然物を基盤としたプローブの開発

项目摘要

【背景・目的】抗癌活性天然物OSW-1は、癌細胞選択的かつ強力な抗癌活性を有する。本研究では、OSW-1のフォトアフィニティープローブを合成し、OSW-1に直接結合し、抗癌活性に関わるタンパク質を探索し同定することを目的とした。これにより、OSW-1の分子レベルでの作用機構を解明することができると期待された。また、OSW-1結合タンパク質を標的とした創薬への応用も期待できた。【結果】まず、球根試料よりOSW-1を単離した。合成条件を最適化し、OSW-1に光反応基および検出基を導入したOSW-1フォトアフィニティープローブを、2工程収率61％と比較的良好な収率で合成することを達成した。合成したプローブはOSW-1の強力な抗癌活性を保持した。次に、合成したプローブがOSW-1結合タンパク質を検出可能なプローブであることを、モデル結合タンパク質BSAを用いて示した。本研究成果を、Asian journal of organic chemistry誌に速報論文として発表した。さらに、簡便にOSW-1結合タンパク質を探索・同定可能なOSW-1ビオチンフォトアフィニティープローブを合成した。合成したビオチンフォトアフィニティープローブは抗癌活性を保持し、既知のOSW-1結合タンパク質であるOSBPを捕捉可能であることを確かめた。今後、癌細胞溶解液及び生細胞中において、本プロ―ブを用いてフォトアフィニティーラベリングを行い、MS解析によりOSW-1結合タンパク質の探索及び同定を行う予定である。

[Background·Objective] OSW-1, a natural substance with anticancer activity, has strong anticancer activity for cancer cell selection. The aim of this study is to synthesize OSW-1 and to explore the relationship between OSW-1 and its anticancer activity. The molecular mechanism of OSW-1 is discussed. The OSW-1 is a combination of the following: [Results] OSW-1 was isolated from the bulbous sample. The synthesis conditions were optimized, and the OSW-1 optical reflection base and the output base were introduced. The OSW-1 optical reflection base and the output base were optimized, and the output ratio was 61%. The output ratio was compared with the output ratio. OSW-1 maintains potent anticancer activity Next, OSW-1 and BSA are used to identify the potential of OSW-1 and BSA. The results of this study are presented in the Asian journal of organic chemistry. OSW-1 is easy to combine with other technologies to explore and identify. The synthesis of OSW-1 in combination with OSBP is possible. In the future, cancer cell lysates and tumor cells in the use of this technology, MS analysis, OSW-1 combined with the quality of the exploration and determination of the predetermined time.