眼内悪性リンパ腫の体細胞変異のエクソーム解析

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眼硝子体液の新規検体を継続して収集しつつ、眼硝子体液より得た細胞をＣＤ１９またはＣＤ２０抗体を用いてＦＡＣＳ　ｓｏｒｔｉｎｇし、腫瘍細胞を抽出し、腫瘍率の向上を図った。染色抗体数を増やし、ｓｏｒｔｉｎｇの効率化をはかり、微量で腫瘍率の様々な眼硝子体液より1%以下の腫瘍細胞を抽出することができるようになった。腫瘍細胞のエクソーム解析に不十分なDNA量しか得られない場合は、MDA法を用いて安定してDNAを増幅させることが可能になり、一部の検体でのエクソーム解析結果を得た。眼の検体では、検体の精度に依存して、解析結果が得られないものもあった。解析結果より、FACS sortingにより腫瘍率が90％以上に向上していること、更に検出した変異遺伝子は、中枢性悪性リンパ腫に類似した遺伝子を高アレル頻度で含んでいることがわかった。また、眼内悪性リンパ腫の原発巣及び再発巣の免疫染色結果から、眼内悪性リンパ腫の原発巣及び再発巣は、97％以上で病理学的にＡｃｔｉｖａｔｅｄ　Ｂ－ｃｅｌｌ（ＡＢＣ）ｔｙｐｅであることがわかり、二次性眼内悪性リンパ腫の臨床像と合わせて、British Journal of Haematology ( Karakawa et al, 2017)にその成果を報告した。現在、得られた結果やＤｉｆｆｕｓｅ　ｌａｒｇｅ　Ｂ－ｃｅｌｌ　ｌｙｍｐｈｏｍａのＡＢＣ　ｔｙｐｅに高頻度な変異遺伝子、中枢性悪性リンパ腫に高頻度な変異遺伝子より、遺伝子の絞り込みを行い、標的遺伝子解析を継続している。