表面プラズモン励起蛍光分光法を用いた吸着タンパク質の配向・形態解析
使用表面等离子体激元激发荧光光谱对吸附蛋白质进行取向和形态分析
基本信息
- 批准号:23700559
- 负责人:
- 金额:$ 2.75万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
- 财政年份:2011
- 资助国家:日本
- 起止时间:2011 至 2012
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
材料表面に吸着したタンパク質の配向・形態変化をin situで評価できる手法の確立を目指し,蛍光標識した抗体の吸着挙動を表面プラズモン励起蛍光分光法(SPFS)を用いて測定した。蛍光標識抗体を吸着させると,抗体の吸着状態によって蛍光分子-金表面間の平均距離が変化し,その距離に依存した蛍光エネルギー移動による消光が起こることを利用した。具体的には,抗体吸着時の反射光強度および蛍光強度を同時計測した。反射光強度変化は吸着量に比例し,蛍光強度は吸着量および蛍光分子-金間距離に関する2つの情報を含んでいる。このため,蛍光強度を反射光強度で割り,抗体分子当たりの蛍光強度を様々な基板表面間で比較した。23年度は,メチル基(CH_3)およびアミノ基(NH_2)を有する自己組織化単分子膜(SAM)をモデル表面として用い,蛍光標識した抗α-フェトプロテイン(AFP)抗体の吸着状態を比較した。抗体分子当たりの蛍光強度を比較すると,NH_2-SAMの方が低くなったことから,NH_2-SAM上の抗体は変性もしくは表面に横たわった形態(side-on)を取ることによって蛍光分子-金の平均距離が小さくなったと考えられる。24年度は,抗体がその抗原認識部位を基板表面側に向けて吸着(下向き吸着)したときの蛍光強度を評価した。NH_2-SAM表面にフルオレセイン(FITC)を固定化し,FITCに対する抗体(蛍光標識済み)を結合させた。そのときの蛍光強度を測定すると,NH_2-SAM表面に吸着させたときよりも高い値を示したことから,蛍光計測によってside-on吸着と下向き吸着を区別可能であることが分かった。以上の結果から,SPFSを用いた蛍光計測によって,吸着した抗体の量的な評価(吸着量)だけではなく質的な評価(配向や形態変化など)も可能であり,タンパク質吸着解析の新たなツールとなり得ることが分かった。
The orientation and morphology of adsorption on the surface of the material are evaluated in situ, and the determination of adsorption on the surface of the material is carried out by excitation spectroscopy (SPFS). The adsorption state of the antibody depends on the average distance between the fluorescent molecule and the gold surface. Specifically, the intensity of reflected light and the intensity of reflected light during antibody adsorption are measured simultaneously. The intensity of reflected light varies in proportion to the adsorption amount, and the intensity of reflected light contains information about the adsorption amount and the distance between the reflected light molecule and the gold. The intensity of the reflected light is different from that of the reflected light, and the intensity of the reflected light of the antibody molecule is different from that of the substrate. In 2003, CH_3 and NH_2 groups were found in the surface of self-organized molecular membrane (SAM), and the adsorption status of AFP antibody was compared. NH_2-SAM is a new type of antibody. In 2004, the antibody was adsorbed to the surface of the substrate at the antigen recognition site and the fluorescence intensity was evaluated. NH_2-SAM surface immobilized with FITC and bound with FITC antibody NH_2-SAM surface adsorption is measured by UV light intensity. The above results show that SPFS can be evaluated by the amount of adsorbed antibody (adsorption amount) measured by fluorescence spectrometry, and the quality of adsorbed antibody can be evaluated by the amount of adsorbed antibody (alignment and morphology change).
项目成果
期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Effect of surface functional groups on adsorption of cell adhesive proteins and cell adhesion using self-assembled monolayers
表面官能团对细胞粘附蛋白吸附和自组装单层细胞粘附的影响
- DOI:
- 发表时间:2012
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Keisuke Sasagawa;Makoto Sakamoto;Hidenori Yoshida;Koichi Kobayashi;Yuji Tanabe;Yusuke Arima and Hiroo Iwata
- 通讯作者:Yusuke Arima and Hiroo Iwata
Effect of surface functional group on adsorption of cell adhesive proteins and subsequent cell adhesion using self-assembled monolayers
表面官能团对细胞粘附蛋白吸附和随后使用自组装单层细胞粘附的影响
- DOI:
- 发表时间:2012
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Keisuke Sasagawa;Makoto Sakamoto;Hidenori Yoshida;Koichi Kobayashi;Yuji Tanabe;Yusuke Arima and Hiroo Iwata;Yusuke Arima and Hiroo Iwata
- 通讯作者:Yusuke Arima and Hiroo Iwata
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