筋衛星細胞の移植による加齢性筋肉減弱症予防法開発の研究

通过肌肉卫星细胞移植开发预防年龄相关性肌肉萎缩方法的研究

• 批准号: 23700824
• 负责人: 郭 輝
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23700824/
• 关键词: 加齢・老化; 加齢筋肉減少症; 筋衛星細胞; 筋幹細胞; 移植

Flow Cytometry Cell Sorting法(FACS)を用い,マウスの下肢筋肉から純度の高い筋衛星細胞が分離し,分離してきた細胞が筋衛星細胞であるかどうかを確認するために形態学の観察・特異的なマーカー染色及び分化誘導などの実験を行った.形態学観察では細胞が単核で,丸く高い増殖能を持つ細胞であることが分かった.PAX7染色もすべての細胞が筋衛星細胞の特徴を持つことがわかった.更に分離誘導後の細胞の形態学観察と筋線維の特異的なマーカーであるeMyHcの染色を行った.誘導後の筋管の形成が観察された.以上の結果から,我々は分離してきた細胞の100%が筋衛星細胞であることが分かった.それから,マウスの筋肉から分離してきた筋衛星細胞を継代した後に,PBSで3回洗い,10,000個/100μl PBS細胞溶液を作成する.1ml注射器と27G注射針を用い,高齢マウス(約18～20月齢,100μl細胞溶液/匹)に麻酔をかけた上で,尾静脈(3匹;対照群,3匹,PBSのみ)と前脛骨筋(3匹;対照群,3匹,PBSのみ)にゆっくりと注入する.3日後から,毎日マウスの握力(室町社マウス用握力計:MK-380Mを用いる)を測定したところ,対照群に比べ,細胞注入群の筋力が有意に変化しなかった.2週間後に,筋損傷モデルを作成する.3日後前脛骨筋を取り出す.前脛骨筋にki67(細胞増殖マーカー)染色を行い,細胞増殖の状態を評価した.ところが,両群の間に有意な変化が見られなかった.以上の結果から,GFPマウスの筋衛星細胞を用い,投与経路を再検討する必要があると考えられる.

Flow Cytometry Cell Sorting (FACS) was used to isolate and identify satellite cells with high muscle purity in lower limb muscle. Morphological observation of the cell nucleus, high reproductive capacity of the cell nucleus, PAX7 staining of the cell nucleus, satellite cells and characteristics of the cell nucleus, PAX7 staining of the cell nucleus. After isolation and induction, the morphological observation of the cells was carried out. After induction, the formation of tendon tube was observed. As a result of the above, I separated 100% of the satellite cells from the satellite cells. After the satellite cells were cultured,PBS was used for 3 backwashes, and 10,000 cells/100μl PBS solution was prepared. 1ml syringe and 27G injection needle were used.(about 18~20 months, 100 μl cell solution/pc). The muscle strength of the injected cells was measured daily. The muscle strength of the injected cells was measured. The muscle strength of the injected cells was measured. The muscle strength of the injected cells was measured 2 weeks later. The muscle damage was measured 3 days later. The anterior tibial tendon ki67(cell proliferation) staining was performed, and cell proliferation status was evaluated. The two sides of the border are facing each other, and the two sides are facing each other. The above results show that GFP can be used in satellite cells, and it is necessary to re-examine the pathway.