筋衛星細胞の移植による加齢性筋肉減弱症予防法開発の研究

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Flow Cytometry Cell Sorting法(FACS)を用い,マウスの下肢筋肉から純度の高い筋衛星細胞が分離し,分離してきた細胞が筋衛星細胞であるかどうかを確認するために形態学の観察・特異的なマーカー染色及び分化誘導などの実験を行った.形態学観察では細胞が単核で,丸く高い増殖能を持つ細胞であることが分かった.PAX7染色もすべての細胞が筋衛星細胞の特徴を持つことがわかった.更に分離誘導後の細胞の形態学観察と筋線維の特異的なマーカーであるeMyHcの染色を行った.誘導後の筋管の形成が観察された.以上の結果から,我々は分離してきた細胞の100%が筋衛星細胞であることが分かった.それから,マウスの筋肉から分離してきた筋衛星細胞を継代した後に,PBSで3回洗い,10,000個/100μl PBS細胞溶液を作成する.1ml注射器と27G注射針を用い,高齢マウス(約18～20月齢,100μl細胞溶液/匹)に麻酔をかけた上で,尾静脈(3匹;対照群,3匹,PBSのみ)と前脛骨筋(3匹;対照群,3匹,PBSのみ)にゆっくりと注入する.3日後から,毎日マウスの握力(室町社マウス用握力計:MK-380Mを用いる)を測定したところ,対照群に比べ,細胞注入群の筋力が有意に変化しなかった.2週間後に,筋損傷モデルを作成する.3日後前脛骨筋を取り出す.前脛骨筋にki67(細胞増殖マーカー)染色を行い,細胞増殖の状態を評価した.ところが,両群の間に有意な変化が見られなかった.以上の結果から,GFPマウスの筋衛星細胞を用い,投与経路を再検討する必要があると考えられる.