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HGFプロモーター遺伝子変異によるEGFRチロシンキナーゼ阻害薬の効果予測

基于HGF启动子基因突变预测EGFR酪氨酸激酶抑制剂的疗效

基本信息

批准号：
23701106
负责人：
荒尾徳三
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kinki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2012
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23701106/
关键词：
HGF 肺がん遺伝子変異 SNP プロモーター

项目摘要

本研究ではHGF発現に関与するプロモーター領域のA繰り返し配列数(polyA)とHGF発現の関連を検討した。固形がん細胞73細胞株を対象にpolyA領域の変異を検討したところ、Short polyA(<25bp)の細胞株が7株、正常型のpolyAの細胞株は66株であった。73細胞株のHGFのmRNA発現をrealtime RT-PCRで解析し、HGFのmRNA高値の細胞株では29%(2株/7株)がShortpolyAで、HGFのmRNA低値株では3%(2株/66株)であった。予想通りHGFのmRNA高値株は、ShortpolyA型である頻度が有意に高いことが示された(p=0.04)。次にHGFタンパクの分泌量をELISAで検討したところ、Short polyAであるH69細胞とIM95細胞が、他株と比べて1000倍以上HGFタンパクを分泌することを見出した。一方、Short polyAでもHGF低値の細胞株が存在したことから、9個のHGFプロモーターのSNPを検討した。HGF高値のIM95細胞は、rs3735520がC/Aアレルであったのに対して、他の18株はCアレルであった。rs72525097についてもShort polyA株で頻度が高い傾向を認めた。HGFプロモーターの解析方法としては、自動ゲル解析装置の簡便スクリーニング系およびシークエンスの検証方法を確立した。臨床検体サンプルについては、肺癌30例に対して検討した。自動ゲル解析装置の測定では、そのうち4例にShort polyA型異常が認められた。TAクローニングし、各10クローンのシークエンスを行ったところ、1例はpolyAが14個と著明な短縮を認めた。結論としてHGFpoly A領域の変異は、がん細胞株および臨床検体でHGF発現量を制御する可能性が示唆された。

This study investigated the relationship between polyA and HGF occurrence in the HGF domain. 73 cell lines of solid type and 66 cell lines of normal type were detected in the polyA domain. Realtime RT-PCR analysis of HGF mRNA expression in 73 cell lines showed that 29%(2/7 cells) of the cell lines with high HGF mRNA expression were shortpolyA, while 3%(2/66 cells) of the cell lines with low HGF mRNA expression were shortpolyA. HGF mRNA was found to be high in plants and short polyA types (p=0.04). The amount of HGF secreted by H69 cells and IM95 cells was 1000 times higher than that of other strains. One, Short polyA and HGF low value cell lines were found, and nine HGF high value SNPs were detected. HGF high value IM95 cells, rs3735520 C/A high value IM 95 cells, rs3735520 C/A high value IM 95 cells, rs3735520 C/A high value IM 95 cells rs72525097 Short polyA strain has a high frequency tendency. The analysis method of HGF monitor and the verification method of a simple cookie system and cookie function for automatic cookie analysis devices have been established. 30 cases of lung cancer were examined by clinical examination. The automatic analyzer detects 4 cases of Short polyA anomaly. TA Conclusion The differences in HGF poly A domain indicate the possibility of controlling HGF production in both cell lines and clinical models.