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ナノバイオ装置を用いた新規免疫抑制薬感受性試験の開発

利用纳米生物装置开发新型免疫抑制剂药物敏感性试验

基本信息

批准号：
25461941
负责人：
福永潔
金额：
$ 3.24万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-25461941/
关键词：
ナノバイオ免疫抑制薬剤感受性免疫抑制薬 IL-2 テーラーメイド医療

项目摘要

移植患者の免疫抑制剤に対する反応には個人差があり、リンパ球刺激後のIL-2産生抑制度が急性拒絶反応の発症に関係していると言われている。そのため、全血を用いて簡便かつ短時間でIL-2産生抑制度を判定するための新規技術開発を目的とした。方法としては、全血をPHAで刺激した群(group1)、さらにFK506（group2）またはDexamethasone(group3)で抑制した群において、0時間～24時間で経時的にIL-2産生量をELISA法にて測定した。また、全血から末梢血単核球(PBMC)を分離した後に上記の群においてBrdU測定試験を行った。さらに、遺伝子発現の変化を見るためにRT-PCRを行った。結果は、Group1～3において、薬剤投与から3時間経過した後にIL-2の分泌量が増加し、group1では刺激後12時間でピークを迎えた。またgroup2,3では刺激後6時間で30%, 12時間で60%のIL-2産生抑制が見られた。刺激後48時間後のPBMC生存率（BrdU）と刺激後6時間後のIL-2産生抑制度（ELISA）を3群間で比較するとgroup2,3で同様に抑制効果が認められた。また、刺激後1時間からIL-2 mRNAの急激な上昇を認め、TNF-α mRNAの上昇はプラトーに達した。結論として、ELISAによるIL-2測定結果は、PBMCの生存率と関連するBrdU測定試験結果と相関関係にあり、IL-2産生量が免疫抑制度判定の迅速かつ簡便な指標として有用であることが確認された。今後は共同研究先である数理物質系鈴木研究室とナノバイオ測定装置を共同開発し、臨床応用に向けた取り組みを継続していく予定である。

The immune suppression of transplant patients is related to the development of acute rejection response, which is related to individual differences in IL-2 production and inhibition of IL-2 production after global stimulation. To determine the inhibition of IL-2 production in a short period of time, it is necessary to develop a new technology for the purpose of Methods: IL-2 production was measured by ELISA at 0 - 24 hours after stimulation with PHA (group 1), FK506 (group 2) and dexamethasone (group 3). The whole blood peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were isolated and then the BrdU assay was performed. In addition, RT-PCR was carried out in the development and transformation of DNA. The results showed that IL-2 secretion increased in group 1~3, group 2~3 and group 3 after stimulation. IL-2 production was inhibited by 30% and 60% at 6 and 12 time points after stimulation in groups 2 and 3 respectively. PBMC survival at 48 hours after stimulation (BrdU) and inhibition of IL-2 production at 6 hours after stimulation (ELISA) were compared between groups 2 and 3. IL-2 mRNA increased rapidly 1 hour after stimulation, TNF-α mRNA increased rapidly 1 hour after stimulation. Conclusion: The results of ELISA and BrdU assay are useful for rapid evaluation of immunosuppression. In the future, joint research will be carried out in the Department of Mathematical Materials, Suzuki Research Laboratory, and jointly developed and used in clinical applications.