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細胞内小器官形成に必要なp97ATPase膜融合の新規必須因子p55の分子機能

p55 的分子功能，是细胞内细胞器形成所需的 p97ATPase 膜融合的新必需因子

基本信息

批准号：
25840078
负责人：
金子弥生
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-25840078/
关键词：
ゴルジゴルジ体 p97 p97ATPase p47 Giantin tethering 膜融合細胞周期

项目摘要

細胞内小器官であるゴルジ体・小胞体の形成・維持のために、二つの異なるp97膜融合経路、即ちp97/p47経路とp97/p37 経路が必要である。p97/p47経路は細胞分裂期における細胞内小器官の再構成に働き、もう一つのp97/p37経路は細胞周期間期における細胞内小器官の維持に働く。申請者は、p97/p47経路がゴルジ体形成に機能するための新規必須因子p55 を単離同定している。本研究では、そのp55の分子機構を明らかすることを目的とし、p97ATPase膜融合の新規必須因子p55を含む「機能的複合体」の単離同定を試みた。ラット肝臓から調製したゴルジ体膜を可溶化し抗p55抗体を用いた免疫沈降によりp55を含む複合体を単離した結果、約400kDaのタンパク質を得ることができた。このタンパク質を質量分析により解析した結果、ゴルジ体に局在するタンパク質Giantinであることが判明した。GiantinはNSF経路でtetheringに関係して機能することが知られている因子である。よって、Giantin/p55が、p97/p47経路において、tethering因子として機能する可能性が考えられた。この可能性を検証するため、可溶化したゴルジ体膜溶液をスクロース密度勾配遠心法により分画し、p55を含むGiantin画分のみから抗Giantin抗体とProteinG-beadsを用いてp55/Giantin-beadsを作製し、そのbeadsにp97やp47を加え、beads-Giantin/p55-p97-p47-p55/Giantin-beadsが形成されるかをbeadsのaggregationの観察によりおこなった。その結果、p97、p47両方を加えるとbeadsはaggregationし、p97単独やp47単独ではbeadsのaggregationは観察されなかった。また、p55を含まないGiantin画分を使用した場合では、p97、p47両方を加えても、beadsのaggregationは観察されなかった。よって、Giantin/p55-p97-p47-p55/Giantinという巨大な複合体が存在し、p97/p47経路において、tetheringとして機能している可能性が示唆された。

Cell small organ, cell formation, maintenance, two different membrane fusion circuits, namely p97/p47 circuit and p97/p37 circuit are necessary. The p97/p47 pathway is involved in the reorganization of intracellular small organs during cell division. The p97/p37 pathway is involved in the maintenance of intracellular small organs during cell cycle interphase. The applicant must have a p97/p47 circuit to form a new regulation with a p55 separation factor. In this study, the molecular structure of p55 was clarified, and the new essential factor for p97ATPase membrane fusion was determined. In addition, the protein expression of p55 was detected by immunoprecipitation, and the protein expression of p55 was detected by immunoprecipitation. The quality of the product was analyzed and the quality of the product was determined. Giantin is a tethering agent. The possibility of the function of Giantin/p55 and p97/p47 is examined. This possibility was demonstrated in the following aspects: dissolution, density matching, separation, p55-Giantin-containing separation, preparation of anti-Giantin antibodies and ProteinG-beads, addition of beads-Giantin/p55-p97-p47-p55/Giantin-beads, and aggregation of beads-Giantin/p97-p47-p55/Giantin-beads. The results, p97, p47, p97, p97, p47, p97, p97, p97 P55, P97, P47, P55, P55, P57, P55, P57, P55, P5 The possibility of existence of Giantin/p55-p97-p47-p55/Giantin giant complex, p97/p47 circuit, tethering and function is shown.