筋委縮性側索硬化症[ALS]におけるCD44と病態進行の関連

CD44 与肌萎缩侧索硬化症 [ALS] 疾病进展的关系

• 批准号: 25861308
• 负责人: 松本 智宏
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-25861308/
• 关键词: 神経変性疾患; 細胞膜表面タンパク

生後6週・12週・18週(発症時)・24週（end stage）のALSモデルマウス（SOD1）と野生型マウス（WT）脊髄からタンパク抽出液を作製し，CD44の発現をWestern blottingで比較した。WTは，ごく少量のCD44発現があるのみで，週齢ごとに変化はなく一定であったが，SOD1では，発症前の時点からWTと比べ CD44の増加を認め，その差は病期が進むほど顕著であった。さらに24週動物の脊髄からmRNAを抽出し，real-time PCRによりmRNAレベルでもCD44を比較したところ，SOD1で有意にCD44が増加していた。続いて生体内においてCD44を発現する細胞を特定するために，生後24週マウス脊髄切片を免疫組織染色。CD44発現はWTでは ほとんど認められなかったが，SOD1では顕著に増加していた。グリア系細胞マーカーとの二重染色結果から，CD44を発現している細胞は一部がmicroglia，大部分がastrocyteであると考えられた。生後1日目のWTの脳より混合グリア培養系を樹立。培養開始から3週間後に，microgliaおよびastrocyteを単離した。microgliaはLPS + IFN-γで72時間刺激することで活性化をおこない，astrocyteはIFN-γ+ TNF-α，bFGFを用いて72時間刺激し活性化をおこなった。刺激によるCD44の発現量を調べるため，いずれも細胞と培養上清を個別に回収し，CD44の発現量をWestern blottingで比較したところ，細胞については，controlではCD44の発現はほとんどなかったが，活性化によりCD44の顕著な増加がみられた。上清についてはcontrolも刺激群もshedding型CD44発現は見られなかったことから，発現上昇したCD44は膜貫通型であると考えられた。

6 weeks, 12 weeks, 18 weeks (onset), 24 weeks (end stage) ALS (SOD1) WT WT, a small amount of CD44 appears, week after week, SOD1 appears, time before onset WT, CD44 increases, time after onset In 24-week old animals, CD44 mRNA was extracted, and CD44 mRNA was increased intentionally by real-time PCR. CD44 is expressed in specific cells in vivo and immunostained in spinal sections at 24 weeks after birth. CD44 appears to be WT, SOD1, and CD44 was detected in some cells and microglia in most cells. A hybrid culture line was established at 1 day after birth. Three weeks after the start of the culture, microglia and astrocyte were separated. microglia is activated by LPS + IFN-γ+ TNF-α, astrocyte IFN-γ+ TNF-α and bFGF. CD44 production is regulated by stimulation, and cell culture supernatant is individually recovered. CD44 production is compared with Western blotting. Cell culture is reversed. CD44 production is controlled by activation. CD44 production is increased. On the clear side, the control group is stimulated by the shedding type CD44, and the rising type CD44 is transmitted through the membrane.