動物プリオン病における宿主応答と細胞内分解機構に関する研究

PrPScの細胞内分解および増加機構について調べた。(1)マウスマクロファージでのPrPSc分解をIFAにより観察し、分解機構を調べた。マクロファージでのPrPSc分解機構に関して、昨年までにウエスタンブロットで得られた結果をIFAにより視覚的に確認した。マウスマクロファージ(Raw・J774)とマウススクレイピーチャンドラー株を任意に組み合わせて実験に用いた。プロテアソーム系での分解にはユビキチンが必要であるが、このユビキチンとPrPScは共局在を示した。また、リソソームマーカーであるLAPM-1ともPrPScは、共局在を示したことから、プロテアソーム系とリソソーム系の両方で分解がおこっている可能性が強く示唆された。また、リソソーム阻害剤やプロテアソーム阻害剤をマクロファージに添加した場合に、PrPScが24時間経過後も細胞内に強く残存することがIFAでも示された。(2)マウスマクロファージでのPrPScの一過性の増加に関して、調べた。マウスマクロファージにマウススクレイピーチャンドラー株を添加し培養した場合には、3-12時間をピークとして、PrPScの一過性の増加が認められ、その後減少した。この一過性の増加はプロテアソーム阻害剤の添加により消失した。リソソーム阻害剤の添加では変化は認められなかった。このことから、プロテアソーム系での分解産物が細胞内でのPrPSc増加に関与していると考えられた。

PrPScの細胞内分解および増加機構について調べた。(1)マウスマクロファージでのPrPSc分解をIFAにより観察し、分解機構を調べた。マクロファージでのPrPSc分解機構に関して、昨年までにウエスタンブロットで得られた結果をIFAにより視覚的に確認した。マウスマクロファージ(Raw・J774)とマウススクレイピーチャンドラー株を任意に組み合わせて実験に用いた。プロテアソーム系での分解にはユビキチンが必要であるが、このユビキチンとPrPScは共局在を示した。また、リソソームマーカーであるLAPM-1ともPrPScは、共局在を示したことから、プロテアソーム系とリソソーム系の両方で分解がおこっている可能性が強く示唆された。また、リソソーム阻害剤やプロテアソーム阻害剤をマクロファージに添加した場合に、PrPScが24時間経過後も細胞内に強く残存することがIFAでも示された。(2)マウスマクロファージでのPrPScの一過性の増加に関して、調べた。マウスマクロファージにマウススクレイピーチャンドラー株を添加し培養した場合には、3-12時間をピークとして、PrPScの一過性の増加が認められ、その後減少した。この一過性の増加はプロテアソーム阻害剤の添加により消失した。リソソーム阻害剤の添加では変化は認められなかった。このことから、プロテアソーム系での分解産物が細胞内でのPrPSc増加に関与していると考えられた。