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光親和性エピトープタグプローブを利用した就眠運動関連受容体の同定と生物有機化学

使用光亲和表位标签探针鉴定睡眠运动相关受体和生物有机化学

基本信息

批准号：
08J03342
负责人：
真鍋良幸
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J03342/
关键词：
FLAG 就眠運動分子プローブ Click Chemistry 免疫沈降法

项目摘要

就眠運動は葉を開かせるLeaf-opening factor(LOF)と葉を閉じさせるLeaf-closing factor(LCF)の2種の生理活性物質により制御されている.その作用機構解明のために,分子プローブを用いてこれらの生理活性物質の標的タンパク質を抗原性ペプチド(FLAG)で標識し、免疫沈降法を用いて精製しようと考えた.FLAGは特異性の高い優れた標識であるが、分子サイズが大きく,これを導入することにより、分子プローブと標的タンパク質との結合能の低下が予想された.そこで,アジドを導入したサイズの小さな分子プローブ用いて標的タンパク質をアジド標識化し,Click chemistryを用いて段階的にFLAGを導入することとした.一昨年度までに,本方法を用いてLOFであるイソレスペデジン酸カリウム標的タンパク質を発見,精製することに成功し,この配列解析を行った.昨年度は,本方法論を利用して,LCFであるジャスモン酸グルコシド(1)の標的タンパク質(MTJG)を検出することで,本方法論が低分子生理活性物質の標的同定に幅広く利用可能な優れた方法論であることを示した.ジャスモン酸グルコシド(1)はアメリカネムノキの葉を閉じさせるLCFである.化合物1に反応性官能基とアジド基を導入したプローブを用いてその標的タンパク質をアジド標識化し,その後,Click chemistryを利用してFLAGの導入を試みた.その際に,銅触媒存在下でのCuAACおよび銅触媒を必要としないCFCCとを検討した.その結果,CuAACを用いた場合に1の標的タンパク質であるMTJGを検出することに成功した.本結果より,Click chemistryを用いる段階的FLAG標識化が生理活性物質の標的同定において幅広く利用可能な優れた方法論であることが示された.

Two kinds of physiologically active substances, Leaf-opening factor (LOF) and LCF (LCF), are used to control the activity of sleep. The mechanism of action is clear, and the molecular marker is used to identify the antigenicity marker (FLAG) of the physiologically active substance, and the immunoprecipitation method is used to identify the target. Flag specificity, high-profile marker, and molecular marker. In this case, the combination of molecular data and molecular data can be reduced to low levels. Use the FLAG of the paragraph to enter the FLAG of the paragraph. In the first year of the year, this method was used in this method to determine the success of the LOF and the analysis of the row. Last year, this method was used to determine the same amplitude of low molecular weight physiologically active substances (LMAPs) by using the method of (1), LCF (1), (1), (1) and (1). I don't know what to say. I don't know. I mean, I don't know. Compound 1 was labeled with the antisense functional group of compound 1. After that, Click chemistry was introduced into the experiment by using FLAG. In the presence of the catalyst, the CuAAC catalyst is necessary. The CFCC catalyst is necessary. In the result of the test, CuAAC successfully checked out the success rate by using the correct MTJG that was used in the first place. In this result, Click chemistry uses the FLAG tag of the segment to identify the same size of the physiologically active substances. The amplitude of the index is the same as that of the physiological active substances.