权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

トマトモザイクウイルスRNA複製機構の研究

番茄花叶病毒RNA复制机制研究

基本信息

批准号：
08J04591
负责人：
錦織雅樹
金额：
$ 1.54万
依托单位：
National Institute of Agrobiological Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

トマトモザイクウイルス(ToMV)の複製には、ウイルスのコードする複製タンパク質に加え、宿主の膜貫通タンパク質TOM1、および低分子量GTP結合タンパク質のARL8が必要である。これまでの研究から、複製タンパク質、TOM1、ARL8はいずれとも相互作用すること、三者を共発現させた出芽酵母の膜画分にRNA 5'キャッピング活性が検出されることを明らかにした。ToMV RNA複製における宿主因子の機能を理解するため、複製タンパク質の性状および5'キャッピング関連活性について出芽酵母を用いてより詳細に解析した。その結果、複製タンパク質を過剰発現する酵母、もしくは複製タンパク質とTOM1を共発現する酵母において、SDS等の変性剤に耐性ながら、DTT等の還元剤に感受性の複製タンパク質高分子量複合体(多量体)が形成されることを発見した。複製タンパク質によるRNA5'キャッピング反応においては、GMP化された複製タンパク質が形成されるが、酵母膜画分の複製タンパク質のうち、還元剤感受性複合体に含まれる複製タンパク質がGMP化された。そのGMP化はTOM1、ARL8の共発現により促進された。還元剤感受性複合体が分子間ジスルフィド結合により形成された可能性を調べるため、130K複製タンパク質のシステイン残基をセリン残基に置換した変異ウイルスを作製した。植物細胞抽出液を用いた試験管内翻訳・複製系による解析から、3か所のシステイン残基が複製タンパク質の還元剤感受性複合体形成能、GMP化能、およびRNA合成能のいずれにも必須であることが分かった。以上の結果より、宿主因子TOM1、ARL8は、ToMV複製タンパク質の分子間ジスルフィド結合の形成を促進し、複合体中の複製タンパク質の5'キャッピング活性を活性化することが示唆された。

The replication of ToMV is necessary for the replication of TOM1 and ARL8, which is a low molecular weight GTP binding protein. This study shows that the interaction of RNA 5'and RNA 5' in budding yeast membrane is the result of the interaction of RNA 1 and ARL8. ToMV RNA replication and host factor function understanding, replication and quality traits, and 5'-linked activity, budding yeast use, detailed analysis As a result, we have discovered that yeast that over-expresses replicative protein, yeast that co-expresses replicative protein and TOM1, are resistant to agents such as SDS, and replicative protein high-molecular weight complexes (multibodies) that are sensitive to reductants such as DTT are formed. Replication of RNA5'protein in yeast membrane, replication of RNA 5' protein in yeast membrane. The GMP process is promoted by TOM1 and ARL8 co-development. The ability to bind between molecules is regulated by the substitution of 130K residues. Plant cell extracts are used to test the ability of replication in vitro, including the ability to form receptive complexes, GMP chemo-chemistry, and RNA synthesis. These results indicate that host factors TOM1 and ARL8 promote the formation of intermolecular binding of ToMV replicators and activate the 5'-cell binding activity of replicators in complexes.