プライモソーム複合体による停止したDNA複製を再開するための分子メカニズムの解明

阐明引发体复合物重新启动停止的 DNA 复制的分子机制

• 批准号: 08J05288
• 负责人: 佐々木 香織
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Kyushu University (2010)Nagoya University (2008-2009)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J05288/
• 关键词: ミクログリア; DNA複製; X線結晶構造解析; プライモソーム; DNA復製; 結晶構造解析; 複製

脳腫瘍や神経変性疾患などほとんど全ての脳疾患において、脳内でミクログリア細胞の活性化および異常な増殖が見られる。このミクログリアの異常な増殖・活性化はDNA複製制御の異常から生じていると考え、それをコントロールしているものは何かを明らかにするために研究を計画した。これまでにミクログリアの活性化・増殖には、その表面に発現しているレセプターTREM2が重要な役割をもつことが示されていたので、TREM2タンパク質を調製し、その構造解析を目的として研究を開始した。前年度までに大腸菌pETベクター系を用いたTREM2の発現系を構築したが、封入体に発現し、リフォールディング条件を検討したものの本来の構造をもつTREM2の調製には至らなかった。今年度はカイコ幼虫や動物細胞、大腸菌コールドショック発現系を用いて検討を行った。その結果、大腸菌コールドショック発現系において可溶性画分として大量に調製することに成功した。得られた可溶性画分をNi-NTAアフィニティーカラムにより粗精製し、スロンビンまたは3Cプロテアーゼを用いてヒスチジンタグの切断条件を決定した。さらに、イオン交換カラムやゲルろ過カラムにより精製を行い、タグと目的のタンパク質を分離できることを確認した。また、SDS-PAGEで単一のバンドとして検出されるほど純度の高いサンプルを得る事ができた。このサンプルを用いて結晶化スクリーニングを行い、いくつかの条件で微結晶を得ることに成功した。

I don't know if I have a sexual disease. I don't know if I have a sexual disease. I don't know. I don't know. Do you want to know how to do the research on your plan? you need to know how to do the research on DNA replication. In order to improve the quality of human colonization, the results show that there is a significant increase in the number of active colonies on the surface of the system, and the results show that the TREM2 is very important. The results show that there are significant differences between the two groups. The purpose of the study is to start the study. In the previous year, the pET virus was used in the TREM2 system, the sealing system was installed, and the sealing system was installed. The conditions were not found in the previous year. In the previous year, the TREM2 system was built in the first place. This year, the animals of the larvae of the mackerel larvae are infected with bacteria and bacteria. According to the results of the experiment, the results showed that there were a large number of successful results. The soluble picture can be divided into two parts, namely, Ni-NTA, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, 3C, Do you want to know if you are going to be separated from each other? please confirm that you have not received any information from each other. In the first place, the SDS-PAGE said that it would be a good idea to make sure that everything was better than before. The results show that you are successful by using the results to crystallize the operation and conditions of the system.