プロトルーディン結合タンパク質の探索・機能解析による神経突起形成メカニズムの解明

通过protrudin结合蛋白的探索和功能分析阐明神经突形成的机制

• 批准号: 08J05427
• 负责人: 松崎 芙美子
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J05427/
• 关键词: プロトルーディン; 小胞輸送; KIF5; 結合タンパク質

プロトルーディンとKIF5の相互作用を介した神経突起形成メカニズムの解明1)プロトルーディンとKIF5は直接的に結合するプロトルーディンとKIF5を昆虫細胞Sf21株および大腸菌BL21株でそれぞれ発現させ、それぞれに付けておいたタグ(GSTおよびHis_6)で精製した。得られたリコンビナントタンパク質を用いて、in vitroでプルダウン実験を行ったところ、両者が直接的に結合していることが明らかになった。2)プロトルーディンはKIF5のアダプタータンパク質として機能するHEK293T細胞における過剰発現系で、既知のプロトルーディン結合タンパク質であるRab11や、今回同定された結合タンパク質であるVeside-associated membrane protein-associated protein-A,-B等が、プロトルーディンの発現に依存的にKIF5と共免疫沈降した。この結果から、プロトルーディンは、これらの結合タンパク質をKIF5に繋ぐアダプタータンパク質として機能することが明らかになった。3)プロトルーディン-KIF5複合体はプロトルーディン結合タンパク質を神経突起に輸送する初代培養神経細胞において、KIF5のプロトルーディン結合領域の過剰発現によりプロトルーディンとKIF5の結合を阻害したところ、プロトルーディンは神経突起から消失し、細胞体に蓄積した。同条件において、プロトルーディン結合タンパク質であるRab11も、プロトルーディンと共に細胞体に蓄積した。KIF5は神経突起へのタンパク質輸送に重要な役割を果たすモータータンパク質であることから、プロトルーディンはその結合タンパク質をKIF5に繋ぐことでそれらの神経突起への輸送を可能にし、神経突起形成に重要なタンパク質群等を神経突起に供給しているという新規のメカニズムが考えられる。

The interaction between KIF5 and KIF5 causes the protuberance to form a divine protuberance, which explains 1) the direct combination of spores, bugs, KIF5, insect cells, Sf21, BL21 strain, BL21 strain, GST strain, his _ 6, and so on. You need to make sure that you can use the computer, the in vitro, the operator, and the person that you want to use. 2) this is the first time that the HEK293T cell has been tested in the system, and that the HEK293T cell has been co-immunized with the Veside-associated membrane protein-associated protein-A,-B, which is the same as that of the Veside-associated membrane protein-associated protein-A,-B and so on. The results show that the results show that the performance of the machine is accurate, and that the information is not available in combination with the operation of the KIF5 machine. 3) in the field, the combination of KIF5 complex and KIF5 was used in the field to detect the loss of cell growth, the disappearance of cell processes and the accumulation of cells. In the same condition, the cell body is stored in the same condition. The cell body is stored in the same condition. In the same condition, the cell body is stored in the same condition. In the same condition, the cell body is stored in the same condition. The KIF5 system is used to transmit important information. The results show that it is possible for the god to send the information that is possible. The combination of the hardware and software shows that it is possible for the KIF5 to rise. The divine protuberance forms a group of important constellations and other divine protuberances are provided to the constellation of new regulations and regulations.