Cdc7とClaspin/Mrc1による複製フォーク形成及び安定維持機構解析

Cdc7和Claspin/Mrc1分析复制叉形成及稳定维持机制

• 批准号: 08J07497
• 负责人: 早野 元詞
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J07497/
• 关键词: Cdc7; Hsk1; Mrc1; 複製開始起点; checkpoint; 分裂酵母; DNA複製チェックポイント; mrc1変異体

本研究において、DNA複製チェックポイントと呼ばれる細胞周期S期途中でのDNA複製の停止を感知し、複製フォークを安定的に維持するカスケードに含まれるMrc1がDNA複製チェックポイントとは異なるDNA複製開始においてどのような役割を持っているのかを分裂酵母をモデル系として使用し、明らかにすることを目的としている。本年実施された研究によって以下の研究成果が得られた。1.Mrc1は複製開始起点へHsk1及びCDK非依存的に初期複製開始起点へ選択的に結合する。Mrc1の複製開始起点への結合をS期初期の細胞を用いて、クロマチン免疫沈降法(ChIP)とマイクロアレイ(chip)を合わせたchIP-chipで観察したところ、S期初期にDNA複製を開始する複製開始起点へ選択的に結合することが分かった。また、この結合はHsk1やCDKの温度感受性変異体でも観察されることから、Mrc1の初期複製開始起点への結合はDNA複製が開始する前、しかもpre-RCが構築された後に、Hsk1及びCDKという2つのS期リン酸化酵素非依存的に結合することが分かった2.Mrc1はチェックポイント非依存的な機能によってhsk1変異による致死を抑圧する。mrc1のチェックポイントにおいて必要な領域を戻して、Checkpoint機能を補ってもhsk1-89変異体による致死はmrc1欠損によって抑圧できた。3.Mrc1はCdc45-MCMの結合を阻害的に制御するMrc1欠損した細胞においてCdc45を免疫沈降すると結合するMcm2の量が増加した。

In this study, during the S phase of the cell cycle, DNA replication is required. DNA replication stops sensing, replication stops, and stable maintenance. This study requires Mrc1 replication, DNA replication, cell cycle, and cell cycle. I don't know what to do. I don't know what to do. This year, the following research results have been awarded. The combination of the 1.Mrc1 copy start point Hsk1 and the CDK independent initial copy start point selection. The starting point of Mrc1 replication is combined with the starting point of DNA replication in S phase, and the combination of immune sedimentation assay (ChIP) and immune sedimentation assay (chip) in the early stage of S phase is combined with the selection of starting point of DNA replication in S phase. The combination of Hsk1 and CDK temperature sensors, the beginning of Mrc1 replication, the start of DNA replication, the start of DNA replication, and the beginning of DNA replication. The combination of Hsk1 and CDK enzyme-independent acidification enzymes in S-phase was used to detect 2.Mrc1-independent acidification enzymes. Independent mechanisms were used to detect hsk1 response and lethal inhibition. The mrc1 system requires the necessary information in the field of information, and the Checkpoint machine is responsible for the death of the mrc1 due to the failure of the mrc1 system. The combination of 3.Mrc1 Cdc45-MCM and blockage control, Mrc1 deficiency, cell cycle, Cdc45, immunoprecipitation, combined with the dose of Mcm2, increased the dose of MCM2.

项目成果

MRC1 DELETION AND FOUR BSK MUTANT BYPASS LETHAL DEFECT OF HSK1 DELETION IN FISSION YEAST

裂殖酵母中 MRC1 缺失和四个 BSK 突变体绕过 HSK1 缺失的致命缺陷

• 发表时间: 2009
• 作者: 藤島祥平;野中洋;王子田彰夫;浜地格;早野元詞
• 通讯作者: 早野元詞

分裂酵母Hsk1キナーゼとMrc1によるDNA複製開始制御機構の解析

裂殖酵母Hsk1激酶和Mrc1的DNA复制起始控制机制分析

• 发表时间: 2008
• 作者: Obara T;Oide S;Ohkubo T;et al;早野元詞
• 通讯作者: 早野元詞