細菌タンパク質翻訳制御機構の解明に関する研究

阐明细菌蛋白质翻译控制机制的研究

• 批准号: 08J09017
• 负责人: 斉 浩
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J09017/
• 关键词: リボソーム; 翻訳

大腸菌翻訳制御システムについて研究している。実験系の立ち上げ、完全再構築した無細胞大腸菌in vitro翻訳システムを基盤技術で、翻訳異常停止複合体をin vitroで構築した。本実験のシステムは翻訳以外の制御反応因子が含まれていないことが、in vitroで構築した複合体の安定性に寄与している。大腸菌翻訳異常停止の制御反応の探索、大腸菌翻訳抽出液から、イオン交換などのクロマトグラフィーで大腸菌抽出液を分画し、それぞれの画分の活性を解析し、絞った画分からTOF MSで幾つの因子を同定した。同定した因子の中のPthの機能解析。Pthには当初に予測した翻訳異常停止依存的なmRNAの切断活性が見られなかった。だが、Pth依存的な翻訳異常停止した複合体の解離が見られた。この詳細の反応機構解析を無細胞翻訳システムで行った。しょ糖密度勾配(SDG)、ゲルろ過などの実験で、in vitroで構築した翻訳異常停止複合体を解析して、その安定性を確認できた、自発的に新生polypeptideが異常停止のリボソーム複合体から解離しないことを証明した。低イオン濃度条件で、Pth依存的に、新生polypeptideの解離が促進された。さらに、このPthの新生polypeptideを解離させる反応にはRRF(ribosome recycling factor)が寄与することが分かった。以上の結果を踏まえて、Pth依存的の異常停止翻訳制御反応を提唱した。これから、QCM水晶発振子マイクロバランス測定法でその反応の確認及び解析の予定がある。

E. coli infection control system Complete reconstruction of cell-free E. coli in vitro The system of the present invention includes the control factors of the inversion, the stability of the construction complex and the stability of the inversion. Exploration of the control of abnormal stop of Escherichia coli, analysis of the activity of Escherichia coli extract, analysis of the activity of Escherichia coli extract, analysis of the activity of Escherichia coli extract, determination of the factor of TOF MS Function analysis of Pth in the same fixed factor. Pth is the first time to detect abnormal stop dependent mRNA cleavage activity. The dissociation of the complex is observed when the Pth dependent complex is turned over abnormally. The detailed analysis of the reaction mechanism is cell-free. SDG, SDG Low concentration conditions, Pth dependence, and dissociation of nascent polypeptides are promoted. In addition, the new polypeptide of the Pth is dissociated from the RRF(ribosome recycling factor). As a result of the above, Pth dependent abnormal stop control is raised. QCM crystal oscillator determination method for the confirmation of the reaction and the determination of the reaction