視神経再生分子プルプリンの魚類網膜発生における役割と転写制御機構の解析

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プルプリンは魚類視神経切断後に視細胞において発現が増加する分泌型レチノール結合タンパク質である。ゼブラフィッシュ発生過程の網膜において、受精後40時間から5日にかけて一過性の発現を示す。本年度は魚類網膜発生におけるプルプリンの機能について調べる目的で、モルフォリノアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いプルプリン遺伝子の発現抑制個体(プルプリンモルファント)を作製し、受精後3日目の初期胚について組織学的手法を用いた解析を行った。受精後3日目のゼブラフィッシュでは、全ての網膜細胞が分化し、層構造を形成している。しかし、プルプリンモルファントは、眼球の大きさが有意に減少し、網膜の層構造が見られなかった。網膜細胞特異的抗体を用いた免疫組織化学染色から、プルプリンモルファントは網膜の細胞分化が抑制されていることが分かった。さらに、BrdUラベリングアッセイ、cyclin D1 mRNA発現から、プルプリンモルファントの網膜では、細胞増殖が亢進していることが分かった。さらに、コンピュータ画像処理システムを用いた視覚依存行動の解析により、視覚機能の発達も見られないことが分かった。以上の結果から、ゼブラフィッシュ網膜発生において、プルプリンは細胞の分化を制御する重要な因子であることが明らかとなった。