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ユニークな一次構造を有する新奇G蛋白質Rab45の生理機能の解析

具有独特一级结构的新型G蛋白Rab45的生理功能分析

基本信息

批准号：
08J10800
负责人：
新谷真未
金额：
$ 1.15万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

内在性Rab45の細胞内局在を調べるため、抗Rab45抗体を作製し免疫染色を行った。その結果、極性化した上皮細胞株MDCKにおいて、Rab45は小さなドット状構造に局在し、アピカルリサイクリングエンドソームマーカーRab11と共局在した。これよりRab45がアピカルリサイクリングエンドソームに局在すると考えられた。さらに脱極性化したMDCKにおいて、Rab45はアクチン陽性な凝集体に局在し、各種のマーカー蛋白質との局在を比較したところ、この凝集体はVAC(Vacuolar Apical Compartment)と呼ばれる細胞内小器官であることが明らかとなった。VAC形成におけるRab45の役割を検討するため、Rab45の過剰発現がVAC形成に与える影響を検討した。その結果、低Ca^<2+>条件下で培養したMDCK細胞におけるVAC形成が、Rab45の過剰発現によって顕著に上昇した。一方、Rab45と同様にアピカルリサイクリングエンドソームに局在するRabllaの過剰発現は、VAC形成率に殆ど影響しなかった。Rab45のRabドメインの活性化型変異体Q600L(GTP結合型)は野生型同様にVAC形成率が上昇したが、不活性化型変異体S555N(GDP結合型)は形成率に影響せず、Rabドメインの活性化がVAC形成の促進に重要であることが明らかとなった。EF-handドメインを欠く変異体(ΔEF)では、複数の小さな構造体のVACが形成された。一方、EF-handとコイルドコイルモチーフの両者を欠く変異体(ΔEF/CC)ではVAC形成は亢進しなかった。以上の結果から、Rab45はRabドメインの活性化に加えて、EF-hand及びコイルドコイルモチーフの各機能ドメインの協調的な働きを介して、VACの形成を制御する可能性が示唆された。

Inherent Rab 45 is regulated in cells, and anti-Rab 45 antibodies are produced by immunostaining. As a result, the polarized epithelial cell line MDCK and Rab 45 have a small, medium-sized structure, and Rab 11 has a total structure. This is the first time I've ever seen a rabbit in my life. In addition, the depolarization of MDCK, Rab 45, positive coagulation group, various protein groups, and VAC (Vacuum Apical Compartment) were compared. Discussion on the influence of Rab 45 on VAC formation and development As a result, VAC formation and Rab 45 production in MDCK cells cultured at low Ca ^<2 +> levels increased. One side, Rab 45 and the other side. Rab 45 and Rab 45 activated variant Q600L (GTP-binding) increase VAC formation rate of wild type variant, inactive variant S555N (GDP-binding) affects VAC formation rate, Rab 45 activated variant plays an important role in promoting VAC formation. EF-hand model is a variable (Δ EF) model, and a VAC model is formed by a plurality of small structures. One side, EF-hand As a result, Rab 45 has demonstrated the possibility of regulating the activation of Rab's components, the coordination of EF-hand and other functional components, and the formation of VAC.