Study on the myosin like protein from brwn alga Laminaria japonica

褐藻海带肌球蛋白样蛋白的研究

• 批准号: 20780150
• 负责人: INOUE Akira
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20780150/
• 关键词: 褐藻類; コンブ類; ミオシン; アクチン; ATP分解酵素; 細胞運動; モータータンパク質; カルモジュリン; ATPase

A cDNA encoding myosin-like protein(LjMLP)was cloned from brown alga Laminaria japonica. LjMLP consists of 634 amino acids, which showed the significant homology with sequences of other species myosin motor domain, but there is no region corresponding to loop-2, converter, neck, and tail domains of other myosins in LjMLP. Recombinant LjMLP(rLjMLP)was expressed in insect cells and purified in the absence or presence of L. japonica calmodulin (LjCaM). When rLjMLP was co-expressed with rLjCaM, purified rLjMLP showed that actin-activated Mg-ATPase and actin translocation activities. rLjCaM showed the highest Mg-ATPase activity(0.68 1/sec)at 25℃ in the presence of 40μM F-actin. Actin movement was observed with the velocity of 0.03μm/sec at 25℃ in in vitro motility assay. Genomic DNA analysis revealed LjMLP gene was comprised of four exons interleaved with three introns. According to RT-PCR analysis, mRNA of LjMLP was expressed independent of cultivated-season of L. japonica.

从棕色藻层japonica克隆了编码肌球蛋白样蛋白（LJMLP）的cDNA。 LJMLP由634个氨基酸组成，该氨基酸与其他物种肌球蛋白运动结构域的序列显示出重要的同源性，但没有与LJMLP中其他肌动物的Loop-2，转换器，颈部和尾巴结构域相对应的区域。重组LJMLP（RLJMLP）在昆虫细胞中表达，并在不存在或存在Japonica钙调蛋白（LJCAM）的情况下纯化。当RLJMLP与RLJCAM共表达时，纯化的RLJMLP表明肌动蛋白激活的MG-ATPase和肌动蛋白易位活性。在40μMF-肌动蛋白存在下，RLJCAM在25°处显示出最高的Mg-ATPase活性（0.68 1/sec）。在25℃体外运动测定时，观察到肌动蛋白运动的速度为0.03μm/sec。基因组DNA分析表明，LJMLP基因的四个外显子与三个内含子交织在一起。根据RT-PCR分析，LJMLP的mRNA表达了独立于Japonica的培养季节。

项目成果

褐藻類の核酸抽出方法、褐藻類の種判別法および褐藻類核酸抽出キット

褐藻核酸提取方法、褐藻种类鉴定方法及褐藻核酸提取试剂盒

• 发表时间: 2010

褐藻類マコンブに存在する新規ミオシンの探索

寻找褐藻 Maccombe 中存在的新肌球蛋白

• 发表时间: 2010
• 作者: 井上晶;尾島孝男
• 通讯作者: 尾島孝男

Protoplast Preparation from Laminaria japonica with Recombinant Alginate Lyase and Cellulase

• DOI: 10.1007/s10126-010-9290-2
• 发表时间: 2011-04-01
• 期刊: MARINE BIOTECHNOLOGY
• 影响因子: 3
• 作者: Inoue, Akira;Mashino, Chieco;Ojima, Takao
• 通讯作者: Ojima, Takao

組換え多糖類分解酵素を利用した褐藻類プロトプラストの効率的な作出

利用重组多糖降解酶高效生产褐藻原生质体

• 发表时间: 2008
• 作者: 井上晶;間篠智恵子;尾島孝男
• 通讯作者: 尾島孝男