創傷歯髄で発現上昇するFIP-2が関与するサイトカイン産生ネットワークの解明

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これまでに創傷歯髄の特徴を明らかにするために, ラットの創傷歯髄モデルを利用して, 創傷歯髄で発現が誘導される新規遺伝子γFIP-2の単離に成功し, その構造・発現解析結果を発表した。そこで申請者は, FIP-2が関与する歯髄炎症制御ネットワークを解明するために, 本年度は1. FIP-2の発現を誘導するシグナル伝達経路の探索, 2. FIP-2を発現抑制したラット歯髄由来細胞の樹立を行った。1. TNF-αで刺激した際のFIP-2の発現にどのようなシグナル伝達回路が関わっているか調べるために, NF-κB阻害剤, JNK阻害剤, ERK阻害剤を用いて検討を行った。10mMのJNK阻害剤を作用させた細胞において, FIP-2タンパクは減少していたが, NF-κB阻害剤, ERK阻害剤を作用させた細胞では阻害剤を作用させていないときと同程度であった。2. FIP-2に特異的なsmall interfering RNAを含む発現ベクターを, 培養歯髄線維芽細胞にリポフェクション法で遺伝子導入した。ピューロマイシンで選択培養を行いFIP-2を発現抑制した培養歯髄線維芽細胞を樹立した。発現抑制は定量PCR法およびウエスタンブロット法にて確認した。以上の結果から, FIP-2がTNF-αを始めとする炎症のシグナリングに関わっていることが解明された。また, FIP-2を発現抑制したラット歯髄由来細胞はFIP-2が関わる歯髄炎症ネットワークの解明に応用できる。