原発開放隅角緑内障の原因遺伝子(Myocilin)の機能解析

原发性开角型青光眼基因（Myocilin）的功能分析

• 批准号: 20592069
• 负责人: 皆見 政好
• 金额: $ 2.08万
• 依托单位: 独立行政法人国立病院機構(東京医療センター臨床研究センター)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20592069/
• 关键词: 遺伝子; クンパク質; 緑内障

1)組み換えMyocilinの発現および精製Myocilinの特性等を明らかにするために、このタンパク質の発現・精製を試みた。条件検討を行った結果、大腸菌、酵母あるいは昆虫細胞ではタンパク質は発現しない、あるいは発現したとしても分解しだ。ところが、培養細胞であるCOS-1において発現させたところ、生産したタンパク質は培養液中に分泌され、そこから高純度のMyocilinを精製することが可能になった。2)Myocilinが相互作用する分子の探索培養液中に分泌したMyocilinはNIH3T3に特異的に結合することを明らかにした。そこで、Myocilinの機能を調べるために、Myocilinが結合する分子の同定を試みた。MyocilinをNIH3T3に結合させた後、架橋剤を反応させMyocilin-標的タンパク質複合体を形成させた。次に、抗Myocilin抗体を用いた免疫沈降実験を行ったところ、結合する因子として分子量30kDaのタンパク質が検出された。現在、この分子を同定するために質量分析計を用いた解析を行っている。3)Myocilinの結合によるNIH3T3への影響の調査通常の培養条件下では、Myocilinが細胞に結合することにより、細胞死等の大きな変化は生じなかった。そこで、緑内障発症に関与することが予想される種々の因子(酸化ストレス、ステロイド剤添加、および虚血)、を与えた時のMyocilinの影響を細胞の形態変化等を指標にして調べた。しかしながら、これらの要因から機能を推定することは困難であった。今後は、他の要因に関しても解析を続け、Myocilinの役割を明らかにする予定である。

1) set of み in え Myocilin の 発 now お よ び refined Myocilin の characteristics を Ming ら か に す る た め に, こ の タ ン パ ク qualitative の 発 now, refined を try み た. Beg を line conditions 検 っ た results, coliform, yeast あ る い は insect cell で は タ ン パ ク qualitative は 発 now し な い, あ る い は 発 now し た と し て も decomposition し だ. と こ ろ が, culture cell で あ る COS - 1 に お い て 発 now さ せ た と こ ろ, production し た タ ン パ ク に secretion in qualitative は cultures of さ れ, そ こ か ら high-purity の Myocilin を refined す る こ と が may に な っ た. 2) Myocilin が interaction す る に secretion in molecular の explore cultures of し た Myocilin は NIH3T3 に specific に combining す る こ と を Ming ら か に し た. Youdaoplaceholder0 で で, Myocilin <s:1> function を べるために, Myocilinが binding する molecule <e:1> to を test みた. After Myocilin を NIH3T3 に combining さ せ た wires, tonic を anti 応 さ せ Myocilin - mark タ ン パ ク qualitative complex を form さ せ た. Time に, resisting Myocilin antibody を with い た immune sink be 験 を line っ た と こ ろ, combined す る factor と し て molecular weight 30 kda の タ ン パ ク qualitative が 検 out さ れ た. Now, the <s:1> <s:1> molecule を is fixed with the するために mass analyzer を and the を line って る る is analyzed by the た た. 3) Myocilin の combining に よ る NIH3T3 へ の influence の investigation usually の conditions で は, Myocilin に が cells combined with す る こ と に よ り, cell death and so on の big き な variations change は raw じ な か っ た. そ こ で, glaucoma 発 に masato and す る こ と が to think さ れ る kind 々 の factor (acidification ス ト レ ス, ス テ ロ イ ド tonic add, お よ び virtual blood), を and え た when の Myocilin の affect の を cell morphology variations を indexes such as に し て adjustable べ た. It is necessary to assume that する する と と と であった であった であった であった <s:1> due to the を function を. In the future, <s:1>, he <s:1> will be determined based on に related to て を analysis を続け, Myocilin を understanding ら にする にする.

项目成果

LOXL1 variants in elderly Japanese patients with exfoliation syndrome/glaucoma, primary open-angle glaucoma, normal tension glaucoma, and cataract

• 发表时间: 2008-10
• 期刊: Molecular Vision
• 影响因子: 2.2
• 作者: M. Tanito;M. Minami;M. Akahori;Sachiko Kaidzu;Yasuyuki Takai;A. Ohira;T. Iwata