GM-CSF中和能の新規アッセイ法の確立

GM-CSF中和能力测定新方法的建立

• 批准号: 20659130
• 负责人: 中田 光
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20659130/
• 关键词: 肺胞蛋白症; 抗GM-CSF自己抗生; 無細胞系; 結合定数; Soluble GM-CSF receptor; 抗GM-CSF自己抗体

GM-CSF自己抗体価は、自己免疫性肺胞蛋白症の重症度と相関しない。我々は、中和能が治療予後とよく相関することを見出した。しかしながら、現行のTF-1細胞を用いたバイオアッセイ法は手技が煩雑な上、再現性に乏しい。GM-CSFシグナル伝達は、細胞膜上に存在しているGM-CSF受容体とGM-CSFが結合することによって惹起されている。そのため、soluble GM-CSF receptor(sGMR)を用いた無細胞系の中和能測定を目指している。平成20年度にトランスジェニックカイコを用いて組み替えヒトsGMRを得て、ビオチン標識したGM-CSFとプレートに固相化しsGMRを用いた無細胞アッセイを作成した。平成21年度には、このアッセイを用いて、自己免疫性肺胞蛋白症の患者血漿からGM-CSFアフィニティ精製したGM-CSF精製抗体と患者血清中のIgG分画存在下で、GM-CSFとGM-CSF受容体の結合阻害能を調べた。その結果、従来の中和能測定法であるGM-CSF依存性のTF-1細胞を用いたバイオアッセイに比べ、再現性が良く、且つ結合阻害能と中和能は相関していた。このことから、無細胞アッセイで求めた結合阻害能がGM-CSF自己抗体の中和能を反映していることを示している。

GM-CSF autoantibodies are associated with severity of autoimmune pulmonary proteinosis. I can see that after the treatment The current TF-1 cell line has been used for a long time, but its reproducibility is lacking. GM-CSF receptor and GM-CSF binding are present on the cell membrane. The use of soluble GM-CSF receptor(sGMR) in cell line-free neutralization assays In 2010, the GM-CSF and GM-CSF were used to prepare cell-free GMR. In 2011, the binding resistance of GM-CSF to GM-CSF receptor was modulated in the presence of purified antibodies and IgG fractions in the plasma of patients with autoimmune pneumoconiosis. The results showed that the GM-CSF dependence of TF-1 cells was better than that of GM-CSF-dependent TF-1 cells, and the reproducibility was good, and the binding resistance and neutralization energy were correlated. The binding inhibition activity of GM-CSF antibody was determined by the reaction of GM-CSF antibody with GM-CSF.

项目成果

A Cell-Free Assay System To Estimate GM-CSF Neutralizing Capacity in Autoimmuno Pulmonary Alveolar Proteinosis

评估自身免疫性肺泡蛋白沉积症中 GM-CSF 中和能力的无细胞测定系统

• 发表时间: 2009
• 作者: Urano S;Tomita M;Motoi N;Sato A;Trapnell BC;Nakata K
• 通讯作者: Nakata K

High avidity cytokine autoantibodies in health and disease: pathogenesis and mechanisms.

• DOI: 10.1016/j.cytogfr.2010.03.003
• 发表时间: 2010-08
• 期刊: Cytokine & growth factor reviews
• 影响因子: 13
• 作者: Masato Watanabe;K. Uchida;K. Nakagaki;B. Trapnell;K. Nakata

Comparative Study of High-Resolution CT Findings Between Autoimmune and Secondary Pulmonary Alveolar Proteinosis

• DOI: 10.1378/chest.09-0097
• 发表时间: 2009-11-01
• 期刊: CHEST
• 影响因子: 9.6
• 作者: Ishii, Haruyuki;Trapnell, Bruce C.;Nakata, Koh
• 通讯作者: Nakata, Koh

Patient-derived GM-CSF Autoantibodies Reproduce Pulmonary Alveolar Proteinosis in Non-human Primates.

患者来源的 GM-CSF 自身抗体在非人类灵长类动物中重现肺泡蛋白沉积症。

• 发表时间: 2010
• 期刊: American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine (in Press)
• 作者: Sakagami T;Beck D;Uchida K;Suzuki T;Carey BC;Nakata K;Keller G;Wood RE;Wert SE;Ikegami M;Whitsett JA;Luisetti M;Davies S;Krischer JP;Brody A;Ryckman F;Trapnell BC.
• 通讯作者: Trapnell BC.

中和抗体など生理活性タンパク質の活性と拮抗し制御する物質の測定方法、生理活性タンパク質とその受容体との結合を制御する物質のスクリーニング方法、および、生理活性タンパク質の受容体への結合を制御する物質を検出するためのキット

拮抗和控制中和抗体等生理活性蛋白质的活性的物质的测定方法、控制生理活性蛋白质与其受体结合的物质的筛选方法、以及控制生理活性蛋白质与其受体结合的试剂盒的方法。用于检测物质

• 发表时间: 2009