GM-CSF中和能の新規アッセイ法の確立

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GM-CSF自己抗体価は、自己免疫性肺胞蛋白症の重症度と相関しない。我々は、中和能が治療予後とよく相関することを見出した。しかしながら、現行のTF-1細胞を用いたバイオアッセイ法は手技が煩雑な上、再現性に乏しい。GM-CSFシグナル伝達は、細胞膜上に存在しているGM-CSF受容体とGM-CSFが結合することによって惹起されている。そのため、soluble GM-CSF receptor(sGMR)を用いた無細胞系の中和能測定を目指している。平成20年度にトランスジェニックカイコを用いて組み替えヒトsGMRを得て、ビオチン標識したGM-CSFとプレートに固相化しsGMRを用いた無細胞アッセイを作成した。平成21年度には、このアッセイを用いて、自己免疫性肺胞蛋白症の患者血漿からGM-CSFアフィニティ精製したGM-CSF精製抗体と患者血清中のIgG分画存在下で、GM-CSFとGM-CSF受容体の結合阻害能を調べた。その結果、従来の中和能測定法であるGM-CSF依存性のTF-1細胞を用いたバイオアッセイに比べ、再現性が良く、且つ結合阻害能と中和能は相関していた。このことから、無細胞アッセイで求めた結合阻害能がGM-CSF自己抗体の中和能を反映していることを示している。