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細胞内における8-オキソグアノシン検出を目指した低分子プローブの開発

开发用于检测细胞中8-氧代鸟苷的小分子探针

基本信息

批准号：
20750139
负责人：
中川治
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Kyushu University (2009)Fukuoka University of Education (2008)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20750139/
关键词：
DNA損傷 8-オキソグアノシン 8-oxoG-clamp 蛍光プローブ

项目摘要

代表的なDNA損傷塩基である8-オキソグアノシン(8-oxo-dG)の簡便迅速な検出法の開発は、変異や疾患との関連性解明する上で極めて重要である。これまでに8-oxo-dGに対して特異的な蛍光消光を示すプローブ"8-oxoG-clamp"を開発している。本研究ではDNA中の配列選択的な8-oxo-dG検出法の開発を目指し、8-oxoG-clampをオリゴヌクレオチド(ODN)に導入し融解温度(T_m)及び蛍光スペクトル測定により評価した。8-OxoG-clampの糖部5',3'位水酸基をそれぞれジメトキシトリチル化、ホスホロアミダイト化し、DNA自動合成装置を用いて8-oxoG-clampをODNへ導入した。T_m測定の結果、ODNに導入した8-oxoG-clampは、相補鎖ODN中の8-oxo-dGに対して天然塩基と同等な親和性を有することが分かった。更に蛍光スペクトル測定より、導入部位により多少の配列依存性が確認されたものの、8-oxoG-clampは8-oxo-dGに対して選択的な蛍光消光能を有することを明らかにした。この結果を受け、8-oxoG-clampの選択的親和性の向上・配列依存性の克服を目指し、種々新規な8-oxoG3clamp誘導体を合成・評価した。その結果、幾つかの誘導体はヌクレオチドレベルにおいて既存の8-oxoG-clamp上回る選択性・特異的な蛍光消光能を有していた。そこで、特にDNA検出に理想的な特性を示したamino-pyridinyl38-oxoG-clampをDNA合成前駆体へと導き、効率よくODNへ導入した。この新規誘導体はODN中の8-oxo-dGに対して優れた蛍光消光を示した。

The representative of DNA Therapy Group 8 (8-oxo-dG) quickly launched a program for the opening of the law and the understanding of the relationship between diseases and diseases. For example, the light extinction of the oxo-dG system shows that you want to use the "8-oxoG-clamp" to start the transmission. In this study, the selected 8-oxo-dG exit method in DNA was used to determine the temperature of melting (TSM) and the temperature of melting (ODN). The 8-OxoG-clamp Sugar Department is located at 3', 5', and the DNA auto-synthesis device is loaded with 8-oxoG-clamp ODN devices. The results of ODN test, 8-oxo-dG test results, 8-DNA test results, 8-test results and sexual differences. The light extinction energy selected by the 8-oxoG-clamp 8-oxo-dG filter is available in the light extinction energy selected for the determination of light, the number of input parts, and the dependence of the column. The results of the test results show that the combination of the selected 8-oxoG-clamp and the dependence of the column can overcome the target index and the new specification 8-oxoG3clamp. The results show that there is a significant difference in the optical extinction energy of the selected sexual features on the existing 8-oxoG-clamp. The ideal properties are shown in the amino-pyridinyl38-oxoG-clamp, ODN, and DNA properties before synthesis of the DNA. In the new specification body ODN, the 8-oxo-dG optical extinction display is displayed.