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iPS細胞を用いたクラッベ病の新しい治療法の開発

利用 iPS 细胞开发克拉伯病新疗法

基本信息

批准号：
20890230
负责人：
孟興麗
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20890230/
关键词：
先天代謝異常症 iPS細胞

项目摘要

クラッベ病モデルマウスからiPS細胞を樹立クラッベ病モデルマウス(twitcher)の皮膚細胞の初代培養を行い、それにレトロウイルスを用いて三つの転写因子(Oct3/4, Sox2, Klf4)を導入した。これらの細胞をFeeder細胞(SNL)の上に播いたところ数多くのコロニーが現れた。12個のコロニーをクロニングしiPS細胞の特微を検討した。RT-PCRで全てのcloneがES細胞の13種類のマーカー遺伝子を発現することが、免疫染色と酵素化学法により未分化細胞のマーカーであるSSEA-1とAlkaline Phosphataseが陽性であることが判明した。培養条件により三胚葉由来の細胞に分化することが確認出来た。さらにヌードマウスの皮下に移植したところ多くの細胞種を含む奇形腫が形成できた。以上により計画通りクラッベ病モデルマウスよりiPS細胞が樹立できた。これらのiPS細胞を神経幹細胞に分化する条件下で培養したところ多くの細胞が神経幹細胞のマーカー(Nestin)を発現した。現在、このiPS細胞に疾患の原因酵素の正常遺伝子の導入を行っている。今後正常遺伝子を発現するiPS細胞を神経幹細胞に分化させtwitcherマウスに移植しその治療効果を検討する予定である。他の疾患モデルからiPS細胞を樹立クラッベ病以外のライソゾーム疾患であるFabry病とムコ多糖症7型のモデルマウスからもiPS細胞が樹立できた。以上によりtwitcherマウス由来のiPS細胞はクラッベ病の細胞治療の開発に非常に有用であろうと思われる。また、Fabry病とムコ多糖症7型由来のiPS細胞も樹立できこれらの細胞はライソゾーム病に対した多様な治療の可能性を検討する面で、またこれらの疾患の発症メカニズムの基礎研究にも有用であると思われた。

The first generation of skin cells were cultured in the first generation (twitcher), and the three factors (Oct3/4, Sox2, Klf4) were used to write the data. The number of broadcast messages on the Feeder cell (SNL) is higher than that of others. There are 12 microphones in the iPS cell, which are very special information. The whole clone ES cells of RT-PCR were detected by immunocytochemistry, and the undifferentiated cells were detected by immunostaining. SSEA-1 Alkaline Phosphatase was detected by immunocytochemistry. The culture condition, the origin of the three embryos, the differentiation of the cells, the confirmation of the cells. It is necessary to subcutaneously transplant multi-cell species that contain odd-shaped cells to form a trap. The above information is intended to help you to get sick. You need to iPS your cell to make sure that you are sick. Under the condition of differentiation of iPS cells, multiple cells are detected. Cell differentiation is detected by Nestin. Now, the iPS cell disease is the cause of the disease. The enzyme is in the normal state. From now on, the normal baby will show that there is no iPS cell differentiation, twitcher cell differentiation, transplant, treatment result, predetermined cell differentiation. He