哺乳類概日リズム形成機構の解明 : in vitro, in vivo単一細胞イメージング

阐明哺乳动物昼夜节律形成机制：体外、体内单细胞成像

基本信息

批准号：
09J02866
负责人：
小野大輔
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度は、生物発光、多電極ディッシュを用い概日時計の中枢である視交叉上核(SCN)の分散培養を行い、個々の細胞の概日リズムにCRY1/CRY2が必要ではない事を明らかとした。さらにこれらの同時測定系を用い、脱同調したPer1発現リズムと同調した電気活動リズムがCry1-/-/Cry2-/-マウスのSCNに存在することを明らかとした。さらに最近Cryl-/-/Cry2-/-マウスのSCNのPER2::LUCに減衰していくリズムが認められ、一貫した結果が得られていない。これらの原因には測定系とマウスのageが考えられる。本年度はこの原因を検証するために、発達段階におけるSCNのPerl-luc,PER2::LUCのリズムを測定した。生後1日目(P1),P7,P14,P21,adult(8-16w)のマウスからSCNを切り出しメンブレン上で培養し、SCN全体の発光リズムを測定した所、P1,P7のCry1-/-/Cry2-/-マウスのSCNからはrobustなリズムが認められたが、このリズムはP14になると減弱し、P21,adultになると消失した。これらの結果はCry1-/-/Cry2-/-マウスのSCNのリズムは生後初期に出現し、離乳するP21付近で消失する事を示す。さらにこのリズムの消失は個々の細胞の脱同調である事を発光イメージングを用いる事で明らかとした。本研究結果はCRY1/CRY2に依存しない細胞間ネットワークが存在すること、そしてこのネットワークは離乳する生後3週間で消失する事を初めて示し、SCNの新たな細胞間ネットワークにCRY1/CRY2が関わっている事を明らかとした。

去年，我们使用生物发光，多电极菜肴来分散昼夜节律时钟的中心上核核（SCN），以揭示Cry1/Cry2对于单个细胞的昼夜节律不是必需的。此外，使用这些同时测量系统，揭示了与cry1 - / - / - /crey2 - / - 小鼠的SCN中存在与患者的PER1表达节奏同步的电活动节奏。此外，在crerl - / - / - /cry2 - / - 小鼠中的PER2 :: LUC中观察到了衰减节奏，并且尚未获得一致的结果。这些原因是测量系统和小鼠的年龄。今年，为了验证这一原因，我们在发育阶段测量了perl-luc和per2 :: luc的节奏。在生命的第一天（P1），P7，P14，P21和成人（8-16W）中切除SCN，并在膜上培养，并测量整个SCN的发光节奏。在用P1和P7的Cry1 - / - / - /cry2 - / - 小鼠的SCN中观察到了强大的节奏，但是当它到达P14时，这种节奏在达到P21和成人时消失了。这些结果表明，Cry1 - / - /cry2 - / - 小鼠的SCN节奏在产后时期出现，断奶后在P21附近消失。此外，通过使用发光成像揭示了这种节奏的丧失。这项研究的结果首次表明，与Cry1/Cry2无关的间网络，并且该网络在断奶的3周时消失，表明Cry1/Cry2参与了新的SCN网络网络。