C型肝炎ウイスル(HCV)構造蛋白質の成熟化、品質管理及び粒子産生機構の解析

丙型肝炎病毒（HCV）结构蛋白的成熟、质量控制和颗粒产生机制分析

• 批准号: 09J07235
• 负责人: 安東 友美
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J07235/
• 关键词: HCV; ウイルス; 次世代シークエンサー; 可視化; ウイルス粒子形成

昨年度までにHCV複製複合体においてATPレベルが亢進している可能性を示した。そこでATPレベルの亢進がHCVの複製に依存していることを確認するために、ウイルスのポリメラーゼ阻害剤を用いて複製を阻害した際のATPレベルの変化を解析した。その結果、HCVの複製を短時間阻害すると複製複合体のATP濃度はさらに亢進するが、長時間阻害すると定常状態に戻ることが確認できた。このことから、ATPレベルの亢進はHCVの複製に依存していることが確認できた。さらにミトコンドリアを染色したところ、ATPレベルが亢進している活性化状態にある複製複合体は、ミトコンドリアと近接していることが確認できた。HCV複製複合体にミトコンドリアから直接的にATPが流入している可能性が示唆された。ミトコンドリアのみならず、ERやゴルジ体、脂肪滴が局在や形態を変化させてHCVの複製及び粒子産生の場を構築している可能性が報告されており、HCVの生活環が細胞内オルガネラの局在に与える影響の一端として、有用な知見が得られたと考える。現在、ATP局在の撹乱がHCV粒子産生・分泌経路に与える影響について解析を行っている。以上の結果は本年度海外誌に発表した。一方で、次世代シークエンサーを用い、パッケージングシグナル関連配列の探索を行なった。これまでのHCV研究では各塩基について優位に存在する塩基をつなげた、仮想的なコンセンサス配列が主に用いられてきた。本年度、複数の次世代シークエンサーと従来のPCR法を組み合わせることで、一患者由来の血清中に存在するHCVのゲノム配列を、全長にわたり経時的に決定することに初めて成功した。現在患者血清内に存在するウイルスの全長配列を比較解析し、パッケージングシグナル関連配列の探索を行っている。さらに本手法は、HCVの多種性が病態や薬剤耐性獲得にどのように寄与するかの理解に繋がると期待できる。

Yesterday's annual ま で に HCV replication complex に お い て ATP レ ベ ル が hyperthyroidism し て い る possibility を shown し た. そ こ で ATP レ ベ ル の hyperthyroidism が HCV の copy に dependent し て い る こ と を confirm す る た め に, ウ イ ル ス の ポ リ メ ラ ー ゼ resistance against tonic を い て copy を resistance against し た interstate の ATP レ ベ ル の variations change を parsing し た. そ の results, HCV の copy を short time resistance against す る と replication complex の ATP concentration は さ ら に hyperthyroidism す る が, long resistance against す る と steady state に 戻 る こ と が confirm で き た. こ の こ と か ら, ATP レ ベ ル の hyperthyroidism は HCV の copy に dependent し て い る こ と が confirm で き た. さ ら に ミ ト コ ン ド リ ア を dyeing し た と こ ろ, ATP レ ベ ル が hyperthyroidism し て い る activation state に あ る replication complex は, ミ ト コ ン ド リ ア と nearly meet し て い る こ と が confirm で き た. HCV replication complex に ミ ト コ ン ド リ ア か ら に が ATP directly into し て い が る possibility in stopping さ れ た. ミ ト コ ン ド リ ア の み な ら ず, ER や ゴ ル ジ body, the fat granule が bureau in や を variations change さ せ て HCV の replication and び particles generated の を build し て い る possibility が report さ れ て お り, HCV の life ring が intracellular オ ル ガ ネ ラ の bureau in に え る influence の end と し て, useful な know see が ら れ た と exam え る. Now, ATP in の 撹 disorderly が HCV particles produce secrete に 経 road and え る influence に つ い て parsing line を っ て い る. The above <s:1> results are published in the overseas journal に of this year た. Party で, next generation シ ー ク エ ン サ ー を い, パ ッ ケ ー ジ ン グ シ グ ナ ル masato even match column の exploration line を な っ た. こ れ ま で の HCV research で は each salt base に つ い て primacy に exist す る salt base を つ な げ た, 仮 think な コ ン セ ン サ ス matched with column が main に い ら れ て き た. This year, the plural の nextgen シ ー ク エ ン サ ー と み 従 を の PCR method to group together わ せ る こ と で serum に exists, a patient origin の す る HCV の ゲ ノ ム column を, span に わ た り 経 に decisions when す る こ と に early め て successful し た. Now patients serum に exist within す る ウ イ ル ス の span arrangement を comparative analytic し, パ ッ ケ ー ジ ン グ シ グ ナ ル masato even match column line の explore を っ て い る. さ ら に this gimmick は, HCV の variety が pathological や 薬 tonic patience for に ど の よ う に send す る か の understand に 繋 が る と expect で き る.

项目成果

Discovery of full-length HCV genome quasispecies by deep sequencing

通过深度测序发现全长 HCV 基因组准种

• 发表时间: 2011
• 作者: Ando T;Aizaki H;Sugiyama M;Mizokami M;Sekizuka T;Kuroda M;Wakita T
• 通讯作者: Wakita T

C型肝炎ウイルス複製複合体におけるATP制御の可視化と機能解析

丙型肝炎病毒复制复合体中 ATP 调节的可视化和功能分析

• 发表时间: 2010
• 作者: 安東友美;今村博臣;鈴木亮介;相崎英樹;脇田隆字;鈴木哲朗
• 通讯作者: 鈴木哲朗