幹細胞維持・分化におけるRNAサイレンシング機構の解析

RNA沉默在干细胞维持和分化中的机制分析

• 批准号: 09J10167
• 负责人: 河村 佳紀
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Keio University (2010)The University of Tokushima (2009)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J10167/
• 关键词: miRNA; 幹細胞; Ago; 小分子RNA; iPS細胞

幹細胞特異的に機能している抑制因子としてのmiRNAを解析することは極めて重要である。近年、多能性幹細胞(inducible Puluripotent Stem : iPS細胞)が作製された。しかしながら、iPS細胞はES細胞との類似性は見られるが、その作製の効率が良いとはいえない。今後、医療への転用を目指して行くにあたって、さらに効率的な方法を加える必要がある。そこで、より安定により効率よくiPS化を誘導する為には、iPS細胞において発現するべきでない遺伝子の発現を抑制する必要がある。以上のことから、Ago特異的な抗体を使用してiPS細胞特異的なmRNAを同定し、iPS細胞作製のより効率化及びその制御機構を解明する。この研究で得られた知見によって、iPS細胞を含む幹細胞維持と分化にmiRNA機構がどのように関与しているかを解明する。本年度は、ヒト及びマウスiPS細胞抽出液からAgoに対するモノクローナル抗体を用いて免疫沈降を行い、得られた免疫沈降物中からmiRNAを単離し、クローニングを行いiPS細胞特異的なAgo結合miRNAを同定を試みた。しかし、iPS細胞からのAgo特異的な抗体を用いた免疫沈降法によってAgoタンパク質を単離しmiRNAを抽出することができなかった。そこで、免疫沈降法で用いる緩衝液の条件検討、使用するips細胞数の検討を行いmiRNAを単離できる条件の解析を行ってきたがmiRNAを抽出することはできたがシークエンスによる配列の同定にまでは至ることができなかった。

Stem cell-specific inhibitors are extremely important for miRNA analysis. In recent years, inducible pluripotent stem cells (iPS cells) have been developed. iPS cells are similar to ES cells, and their efficiency is good. In the future, medical treatment will be carried out in a timely manner. It is necessary to suppress the development of iPS cells. The use of Ago-specific antibodies, the identification of iPS cell-specific mRNA, the efficiency of iPS cell production, and the understanding of regulatory mechanisms This research has revealed that iPS cells contain miRNA mechanisms for stem cell maintenance and differentiation. This year, we tested the identification of miRNA binding to Ago in iPS cell-specific extracts and in iPS cell-specific extracts. Ago-specific antibodies were isolated from iPS cells by immunoprecipitation In addition, the immune sedimentation method can be used to analyze the conditions of the buffer solution and the number of ips cells.