新規エネルギー代謝抑制因子Twist1会合分子群の網羅的同定と肥満治療への応用

Twist1の会合分子群を網羅的に同定するため、HA-tag、Flag-tag融合型Twist1アデノウイルスを作成した。これらのアデノウイルスを褐色脂肪細胞株に感染させ、抗舩抗体、Flag抗体で免疫沈降し、SDS-PAGE、銀染色後、マススペクトロメトリーで会合分子群を同定するための、基礎検討を行った。今後、実際の検討を行っていく。また、Twist1の発現により、遺伝子発現のプロファイルがどのように変化するかを検討した。マクロファージと脂肪組織においてTwist1が高発現している、ap2-Twist1-Transgenic(Tg)マウスおよび野生型マウスより、骨髄由来マクロファージを採取、RNAを抽出し、マイクロアレイにより検討を行った。結果として炎症や泡沫化に関わる幾つかの遺伝子群が、変化していることが判明した。そして、Twist1の動脈硬化巣における役割についての検討を行った。動脈硬化巣においては、マクロファージの炎症と泡沫化が重要な役割を果たすことが知られる。代表的な粥状動脈硬化モデルである高脂肪食負荷ApoE KOマウスで、免疫染色法にて評価したところ、動脈硬化巣の内膜下に浸潤しているマクロファージにおいて、Twist1が発現していた。また、動脈硬化巣で発現が上昇する炎症性サイトカインTNF-αでマクロファージを刺激すると、Twist1の発現が上昇することがわかった。一方、Twist1を強制発現したマクロファージでは、泡沫化は変化を認めなかったが、炎症は抑制されていた。次に、in vivoにおける役割を検討するため、Tgおよび野生型マウスを、ApoE KOマウスと掛け合わせ、高コレステロール食を負荷し、動脈硬化を惹起した。予想に反して、Tgマウスに於いて、動脈硬化病変形成は促進していた。現在、そのメカニズムを明らかにするため、Tgマウス及び野生型マウスよりマクロファージを採取し、泡沫化及びアポトーシスの差を検討している。

Twist1の会合分子群を網羅的に同定するため、HA-tag、Flag-tag融合型Twist1アデノウイルスを作成した。これらのアデノウイルスを褐色脂肪細胞株に感染させ、抗舩抗体、Flag抗体で免疫沈降し、SDS-PAGE、銀染色後、マススペクトロメトリーで会合分子群を同定するための、基礎検討を行った。今後、実際の検討を行っていく。また、Twist1の発現により、遺伝子発現のプロファイルがどのように変化するかを検討した。マクロファージと脂肪組織においてTwist1が高発現している、ap2-Twist1-Transgenic(Tg)マウスおよび野生型マウスより、骨髄由来マクロファージを採取、RNAを抽出し、マイクロアレイにより検討を行った。結果として炎症や泡沫化に関わる幾つかの遺伝子群が、変化していることが判明した。そして、Twist1の動脈硬化巣における役割についての検討を行った。動脈硬化巣においては、マクロファージの炎症と泡沫化が重要な役割を果たすことが知られる。代表的な粥状動脈硬化モデルである高脂肪食負荷ApoE KOマウスで、免疫染色法にて評価したところ、動脈硬化巣の内膜下に浸潤しているマクロファージにおいて、Twist1が発現していた。また、動脈硬化巣で発現が上昇する炎症性サイトカインTNF-αでマクロファージを刺激すると、Twist1の発現が上昇することがわかった。一方、Twist1を強制発現したマクロファージでは、泡沫化は変化を認めなかったが、炎症は抑制されていた。次に、in vivoにおける役割を検討するため、Tgおよび野生型マウスを、ApoE KOマウスと掛け合わせ、高コレステロール食を負荷し、動脈硬化を惹起した。予想に反して、Tgマウスに於いて、動脈硬化病変形成は促進していた。現在、そのメカニズムを明らかにするため、Tgマウス及び野生型マウスよりマクロファージを採取し、泡沫化及びアポトーシスの差を検討している。