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組換え酵素Creに依存した配列特異的レンチウイルスベクターの開発

依赖重组酶 Cre 的序列特异性慢病毒载体的开发

基本信息

批准号：
10J02280
负责人：
亀山雄二郎
金额：
$ 0.45万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J02280/
关键词：
配列特異的遺伝子導入 Cre-loxP レンチウイルスベクター

项目摘要

レンチウイルスベクターは目的遺伝子を細胞染色体に組込むことができるので安定した発現が必要な場合に汎用されている。しかし、遺伝子を宿主細胞の染色体配列にランダムに組込んでしまうので、導入遺伝子が発現抑制を受けたり、感染細胞の癌化を引き起こしてしまう危険性が指摘されている。本研究では、ランダムな遺伝子の組込みを触媒している酵素であるインテグラーゼを欠損させた非組込み型レンチウイルスベクター粒子内に配列特異的組換え酵素Creを取り込ませることで、宿主細胞染色体の配列に特異的に遺伝子を組込むことが可能なレンチウイルスベクターを開発することを目的としている。本年度は、ウイルス粒子内にCreタンパク質を取り込ませるためのウイルスタンパク質と組換え酵素Creの融合タンパク質発現用プラスミドを作製した。また、Creとその認識配列であるloxP配列の反応を用いた遺伝子組込みの効率はloxP配列を構成しているアーム配列及びスペーサー配列に依存することがこれまでの研究成果により示唆されている。そこで、Creによる遺伝子組込みを効率的に行うために4種類のアーム配列と11種類のスペーサー配列を組み合わせた44種類のloxP配列のCreによる遺伝子組込み効率を測定することで組込み効率の高いloxP配列をスクリーニングすることを試みた。その結果、野生型のスペーサー配列と遺伝子組込みに汎用されているアーム配列(lox66/71)を組み合わせたloxP配列より約4倍高い組込み効率を示すloxP配列をスクリーニングすることができた。今後、作製したプラスミドを用いてレンチウイルスベクターを生産し、このウイルスベクターを用いて配列特異的に遺伝子を組込むことができるかどうかを検討する予定である。

In order to find out if it is necessary to do so, we should use the cell chromosome tissue, chromosome tissue, cell chromosome, cell chromosome, chromosome, The chromosomes of the host cell were arranged in the host cell, the host cell chromosomes were arranged, and the The purpose of this study is to detect the activity of the enzyme Cre, which is a specific enzyme in the particles. The host cell chromosome is equipped with a special cell chromosome. It is possible that the host cell chromosomes are specially arranged in the host cell chromosomes. This year, the Cre in the particles has been collected. This year, the enzyme Cre has been fused into particles. This year, the enzyme fusion enzyme has been used to make sure that the enzyme is used as an indicator. This is not true. In this case, we know that there is a problem in the allocation of loxP. In reverse, we use the sub-group to determine the rate of failure in loxP. We do not know what to do. We do not know what to do. For example, the rate of failure of sub-groups such as Cre, Cre, loxP, etc., the rate of failure, the rate of failure. The results showed that the sub-group of wild-type wild-type virus was assigned to the subgroup of wild-type virus, and the combination of wild-type and wild-type animals was used. The results showed that the rate of loxP was about 4 times higher than that of loxP, which indicated that loxP was assigned to loxP. In the future, you will need to know if you are going to have a problem with each other. In the future, you will be able to make sure that you are not in a position to make a decision.