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カイコ摂食行動調節因子(HemaP)の構造活性相関および摂食行動の分子機構の解明

阐明家蚕取食行为调节剂（HemaP）的构效关系及取食行为的分子机制

基本信息

批准号：
10J04193
负责人：
諸岡信克
金额：
$ 0.9万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J04193/
关键词：
カイコ摂食行動 30Kタンパク質 HemaP CDスペクトル多量体形成二量体

项目摘要

1.カイコHemaPの構造活性相関:昨年度に引き続き大腸菌発現系またはアミノ酸合成を用いて作製したペプチドを用いてカイコHemaPの構造活性相関の解明を目指した。具体的には、17種類の部分欠損のカイコHemaP、および3種類のカイコHemaPとエビガラスズメHemaPのキメラHemaPを作成し、それらの生理活性測定、CDスペクトル解析、ゲル濾過クロマトグラフィーを用いた多量体形成能の解析を行った。その結果、N末端から10-30残基(コア領域)がHemaPの種特異的な活性発現および二量体形成に必須であることが明らかとなった。また、HemaPのコア領域はαヘリックス形成能が他の領域と比較して高いことが明らかとなった。さらに、この高いαヘリックス形成能と活性発現には、コア領域の構造安定性が重要な役割を有していることをコア領域のNおよびC末端を化学修飾した部分ペプチドを用いた解析から明らかにした。2.HemaP結合タンパク質の機能解析:昨年度、カイコの幼虫体液からHemaP結合タンパク質として30Kタンパク質の1つ30K6G1を単離同定した。作製した組換え30K6G1は、in vitroにおいてもカイコHemaPと相互作用することが確認された。また、2種類の摂食モチベーションの評価系を用いた解析から、組換え30K6G1はカイコHemaPと複合体を形成することで、HemaPの摂食モチベーションを上昇させる生理活性を低下させることが明らかとなった。さらに、カイコHemaPおよび30Kタンパク質の体液中の存在量とmRNAの発現レベルを、成長段階を追って解析した。その結果、5齢後期のカイコ幼虫において、体液中のHemaP量が減少する一方で、30Kタンパク質の存在量が増加することによって、摂食モチベーションの上昇が抑制されることが示された。

1. Correlation of structural activity of HemaP: the discovery of Escherichia coli in the past year is related to the use of acid synthesis in the production of HemaP. Specifically, 17 kinds of partial loss HemaP, 3 kinds of HemaP, HemaP, HemaP As a result, N-terminal residues 10-30 (U-domain) are essential for HemaP's species-specific activity and two-dimensional formation. The domain of HemaP is different from that of other domains. In addition, the structural stability of the high-level α-ray field is important for chemical modification of the N-and C-terminal of the high-level α-ray field. 2. Functional analysis of HemaP binding substance: yesterday, the larvae 'body fluids of the chicken were separated from HemaP binding substance by 30K. The quality of HemaP binding substance was 1:30K6G1. The interaction between the two groups was confirmed. 2 kinds of food and drink evaluation system, use analysis, composition, 30K6G1, HemaP complex formation, HemaP food and drink evaluation system, physiological activity, low, bright, high, low, low In addition, the expression of mRNA and its growth stages were analyzed in the body fluids of the patients. As a result, when exposed to late 5-year-old female larvae, the amount of HemaP in body fluids decreased, but the amount of 30K protein in body fluids increased, and the increase in "food poisoning" was suppressed.