イネ糖タンパク質NPPのプラスチド局在化メカニズムの解明

水稻糖蛋白NPP质体定位机制的阐明

• 批准号: 10J06596
• 负责人: 金古 堅太郎
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J06596/
• 关键词: 糖タンパク; オルガネラ; タンパク質輸送; 糖タンパク質

イネNPPの糖鎖構造解析NPPを共発現させた培養細胞から精製した時と同様に、NPP1強発現植物の葉からパーコール密度勾配遠心法により葉緑体を単離した。葉の全タンパク質と葉緑体タンパク質ではCon Aレクチンの認識性が異なるため葉緑体単離は成功し、葉緑体以外の糖タンパク質の混在は少なかった。この葉緑体タンパク質を用いて、Con A SepharoseでNPP1を精製した。精製した葉緑体NPP1から遊離させた糖鎖をGlycoblotting法で、糖鎖を精製、さらに質量分析により糖鎖構造を解析した。葉緑体NPP1からは65種類のN結合型糖鎖が同定された。またそのうち56種類が複合型もしくは少マンノース型の糖鎖構造であった。これは細胞全体から精製した時と同様の結果を示し、NPPが細胞内ではほとんどプラスチドに局在していることを示し、NPPの局在メカニズムは、ERゴルジ体の小胞輸送によってほかの糖タンパク質と同様なシステムで、ゴルジ体で修飾され、輸送されてる。イネNPPのプラλチド輸送メカニズムの解析NPP1強発現にトランスゴノレジマーカー(ST-GFP)、をイネに導入し、電子顕微鏡により構造観察と抗GFP抗体による免疫電子顕微鏡観察を行った;NPP1/ST-GFP共発現イネでは、プラスチド内にゴルジ体の周りに存在した輸送小胞と同程度の電子密度を持った小胞が観察された。また、抗GFP抗体では、プラスチドの外膜に接触した小胞や内部にあった小胞の周りにに金粒子が観察された。このことは前年、NPP1強発現体で蛍光顕微鏡によりプラスチドからST-GFPのシグナルが観察されたことを支持し、より強くプラスチドに局在する糖タンパク質は、ゴルジ体の膜ごとプラスチド内へ輸送されていることを示唆している。

Analysis of NPP Glycol Lock Structure NPP co-expression in cultured cells, purification and isozymes NPP1 strong expression in leaves, isozymes and isozymes of chloroplasts The whole chloroplast of leaves is different from that of chloroplasts, and the sugar is different from chloroplasts. Chloroplast purification, Con A Sepharose, NPP1 Chloroplast NPP1 was purified by Glycoblotting and analyzed by mass spectrometry. Chloroplast NPP1 contains 65 types of N-linked glycans. 56 kinds of sugar lock The results of the purification of the whole cell are shown in the following ways: NPP is in the cell, ER is in the cell, and ER is in the cell. Analysis of NPP1/ST-GFP co-expression and protein transfer mechanisms: NPP1/ST-GFP co-expression and protein transfer mechanisms: ST-GFP (ST-GFP), NPP1/ST-GFP, NPP1/ST-GFP. Anti-GFP antibodies are detected in the outer membrane of the cell and in the inner membrane of the cell This is the first time that NPP1 has been used to enhance the detection of ST-GFP by optical microscopes, and to enhance the detection of ST-GFP by optical microscopes.

项目成果

Structure and function of nucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterases localized in plastids of rice

水稻质体中核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶的结构和功能

• 发表时间: 2011
• 作者: M.Arisawa;Y.Nihei;T.Suzuki;M.Yamaguchi;Uosaki H;Fujiwara M;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;Kentaro Kaneko;金古堅太郎;金古堅太郎;金古堅太郎
• 通讯作者: 金古堅太郎

プラスチド局在糖タンパク質NPPの糖鎖構造解析

质体定位糖蛋白 NPP 糖链的结构分析

• 发表时间: 2011
• 作者: M.Arisawa;Y.Nihei;T.Suzuki;M.Yamaguchi;Uosaki H;Fujiwara M;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;Kentaro Kaneko;金古堅太郎;金古堅太郎
• 通讯作者: 金古堅太郎

PLASTID TARGETING OF NPP GLYCOPROTEIN FROM THE GOLGI APPARATUS THROUGH THE SECRETORY PATHWAY IN RICE CEL

质体通过水稻细胞中的分泌途径靶向来自高尔基体的 NPP 糖蛋白

• 发表时间: 2010
• 作者: M.Arisawa;Y.Nihei;T.Suzuki;M.Yamaguchi;Uosaki H;Fujiwara M;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;Kentaro Kaneko;金古堅太郎;金古堅太郎;金古堅太郎;Kentaro Kaneko
• 通讯作者: Kentaro Kaneko

Differential localizations and functions of rice nucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase isozymes 1 and 3

• DOI: 10.5511/plantbiotechnology.10.1228a
• 发表时间: 2011-01-01
• 期刊: PLANT BIOTECHNOLOGY
• 影响因子: 1.6
• 作者: Kaneko, Kentaro;Yamada, Chie;Mitsui, Toshiaki
• 通讯作者: Mitsui, Toshiaki

プラスチド局在糖タンパク質NPPのグライコミクス解析

质体定位糖蛋白 NPP 的糖组分析

• 发表时间: 2011
• 作者: M.Arisawa;Y.Nihei;T.Suzuki;M.Yamaguchi;Uosaki H;Fujiwara M;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;福島弘之;Kentaro Kaneko;金古堅太郎
• 通讯作者: 金古堅太郎