ツメガエル幼生尾における免疫による再生能規定要因の解析と、成体の再生能の賦活化

非洲爪蟾幼虫尾部免疫再生能力影响因素分析及成虫再生能力激活

基本信息

批准号：
10J08669
负责人：
直良悠子
金额：
$ 0.9万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

平成22年度末までの研究では、再生能に依存して発現パターンの変化する遺伝子を同定することを目的に、不応期の免疫抑制剤(FK506)処理/非処理の個体群間で発現パターンの異なる遺伝子をDkmrential Display(DD)法により探索した。その結果、3種の候補遺伝子(#1,2,3)を得、これらについて定量的RT-PCR法により発現解析を行った。本年度は、これら遺伝子のさらなる発現解析および、遺伝子ノックダウン法による機能解析を行った。また、Xenopus tropivalisの利用に向け、まずはX.tropivalisにおける再生不応期の探索を行った。#1は、発生過程では不応期開始期に一過的な発現上昇を示し、不応期尾切断後では切断から10時間後に顕著な発現上昇を示すものの、この発現上昇はFK506処理により抑制された。したがって、#1は不応期選択的に発現し、尾切断端で増殖する再生芽細胞を攻撃する免疫関連因子であると考えた。モルフォリノアンチセンスォリゴ(MO)を2細胞期の胚に顕微注入することにより遺伝子ノックダウンを行ったところ、MO注入胚はそのほとんどが不応期に至るまでの胚発生過程で死亡した。このことは、#1が不応期には尾の再生に阻害的に機能する一方で、発生過程では生存・発生に必須な役割を担うことを示唆している。ツメガエルの尾再生過程でこのような働きをする遺伝子の発見はこれまでになく、再生生物学において薪規な知見となると考えられる。Xenopus tropivalisについて不応期の有無を検討したところ、再生能の程度が変化する傾向が見られた。再生能と免疫応答との関連を探るに当たり、実験生物としてのXenopus tropivalisの有用性は重要である。今後の研究に向け、重要な結果が得られたと考えている。

直到2010财政年度结束时的研究探索了使用DKMRentials Displise（DD）方法（DD）方法，具有不同的经过治疗和未经处理的种群之间具有不同表达模式的基因，目的是根据其再生能力识别具有改变的表达模式的基因。结果，获得了三个候选基因（＃1、2、3），并通过定量RT-PCR对这些基因进行了表达分析。今年，使用基因敲低方法对这些基因进行进一步的表达分析和功能分析。此外，为了使用Tropivalis Xenopus，我们首先搜索了X.tropivalis中的再生难治期。＃1显示了在难治阶段开始时发育过程中表达的短暂增加，并且在裂解后10小时，在难治性尾巴裂解后表达显着增加，但是通过FK506处理，表达的增加被抑制。因此，我们认为＃1是一种与免疫相关的因素，它会攻击在难治期间选择性表达并在尾部较切口下增殖的再生再生再生细胞。基因敲低是通过在2细胞阶段将吗啡胆胆OLIO（MO）微注射到胚胎中进行的，并且大多数MO注射的胚胎在胚胎发育期间死亡，直到难治阶段。这表明，尽管＃1在难治时期内以抑制方式起作用，但在发育过程中，它在生存和发展中起着至关重要的作用。以前没有发现在爪蟾尾部再生过程中执行这种功能的基因，并且被认为是基于柴火的再生生物学知识。当检查对爪蟾的耐火周期的存在或不存在时，会改变再生能力程度的趋势。在探索再生潜力与免疫反应之间的关联时，对爪蟾作为实验生物的有用性很重要。我们认为，未来研究已经获得了重要的结果。