非相同末端結合能破壊株を用いた高効率な遺伝子組換え作物作製技術の新規基盤開発

利用非同源末端连接能力破坏菌株开发高效转基因作物生产技术新平台

• 批准号: 21658003
• 负责人: 田中 秀逸
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Saitama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21658003/
• 关键词: 遺伝子ターゲッティング; DNA二本差切断修復; 相同組換え; 非相同末端結合; 育種

本研究は、当研究室においてアカパンカビで見いだした高効率の遺伝子ターゲッティング法の植物における有効性をモデル植物であるシロイヌナズナのカルス細胞で明らかにすることにあった。昨年度、非相同末端結合に関わるAtLIG4遺伝子の破壊株において、標的遺伝子であるAG遺伝子にターゲットされたカルスが得られ、アカパンカビで見いだされた手法が植物にも有効であることが示唆され、それが論文に掲載された。本年度は、宿主として、AtKU70およびAtKU80遺伝子の破壊株について実験を試みた。KU70遺伝子にT-DNAが導入された系統から得られた種子を藩種し破壊株を得ようとしたが、残念ながら破壊株は得られなかった。この系統を用いてAG遺伝子のターゲッティングを行ったところ、多数の選択遺伝子陽性カルスが得られたもののそれらの中にターゲットされたカルスは見つけられなかった。間接的ではあるが、AtLIG4破壊株での実験が正しいことが示唆されたと言える。KU80については破壊株が得られたので、同じ系統から得られた非破壊株および野生株を使い、AG遺伝子の破壊用コンストラクトの導入を行った。現在選択培地上での選択を継続している。今後、引き続き、他の遺伝子として準備したKU70遺伝子破壊実験、およびKU70遺伝子のRNAiを行った場合の効果について解析を進める。

This study was conducted in the laboratory to investigate the high efficiency of plant growth and development. Last year, non-identical terminal binding was found in AtLIG4 gene, which was found in the plant, and the target gene was found in the plant. This year, the host, AtKU70 and AtKU80 have been tested. KU70 gene T-DNA is introduced into the system. This system uses the following methods: Indirect KU80 is a new type of plant. It can be used to import wild plants and AGs. Now the selection process is taking place on the ground. In the future, we will continue to analyze the effects of RNAi on KU70 gene in preparation for the introduction of KU70 gene.

项目成果

High efficient gene targeting on the AGAMOUS gene in an ArabidopsisAtLIG4 mutant.

高效基因靶向拟南芥AtLIG4突变体中的AGAMOUS基因。

• 发表时间: 2010
• 期刊: Biochemical and Biophysical Research Communications - BBRC
• 作者: Shuuitsu Tanaka;C. Ishii;S. Hatakeyama;H. Inoue
• 通讯作者: H. Inoue