「変性β2ミクログロブリン仮説」の検証

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血清β_2-microglobulin(β_2-M)は、高齢者のadverse health outcomeの独立した危険因子である(Shinkai et al.Arch Intern Med,2008)。本研究事業は、その機序に迫るべく変性β_2-M仮説(詳細は略)を検証することが目標であった。昨年度は、まずプロテオーム解析の手法を用いて変性β-2-Mの検出法を開発した。その手順は、抗ヒトβ_2-M抗体固定化ビーズの作成→抗体アフィニティーによる血清中のβ_2-Mの吸着濃縮→二次元電気泳動法による変性β_2-Mの分離、質量分析による変性β_2-Mの構造解析、というものである。これを応用して、若年者サンプル6例、高齢者サンプル6例を対象にβ_2-Mの分子修飾の有無を調べた。最終的には、質量分析法において、若年者サンプルでは理論的Mwから16Da離れた箇所(Lower mass)にのみピークが見られたのに対し、高齢者サンプルではLower massからさらに16Da離れた箇所(Higher mass)にもピークが見られた。すなわち、高齢者の血清中β_2-Mの一部は酸素添加されていることが判明した。次の段階として本年度は、酸素添加β_2-Mとadverse health outcomesとの因果関係すなわち「変性β_2-M仮説」の検証をすべく、研究計画を立てた。まず、性、年齢階級別の酸素添加β_2-Mの出現率を求める予定であったが、その段階で、β_2-Mの精製過程に問題があり質量分析スペクトラムが安定せず、データの再現性に課題があることが判明した。そこで、年度後半は、酸素添加β_2-Mの検出法の改良を行い、安定したデータを得る方法を開発することに時間を費やすこととなった。「変性β_2-M仮説」の検証という最終目標は達成できなかったが、本研究で改良された方法を応用して、近い将来ぜひ実現したいと考えている。