Development of novel retroviral vectors showing no gene silencing effect

开发无基因沉默效应的新型逆转录病毒载体

• 批准号: 22580104
• 负责人: MIYAKE Katsuhide
• 金额: $ 3.08万
• 依托单位: Ishikawa Prefectural University (2012)Nagoya University (2010-2011)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22580104/
• 关键词: SUMO; インテグラーゼ; レトロウイルス; PIASy; Pc2; MLV; PML; サイレンシング; HIV

Pulldown assay and coimmunoprecipitation of cell extracts in which the integrase or reverse transcriptase of Moloney murine leukemia virus was transiently expressed showed that both enzymes interacted with PML proteins. In infected cells, interaction between the integrase and PML was also observed. Transient expression of PIASy and SUMO proteins facilitated SUMOylation of the integrase but had no apparent effects on the interaction with PML. A FLAG-tagged integrase colocalized with PML protein possibly in the PML body. Knockdown of PML by small interfering RNA resulted in reduced viral cDNA levels and integration efficiency. This suggested that PML proteins activated reverse transcription. Furthermore, we discovered direct interaction between the integrase and polycomb protein, Pc2.

对瞬时表达莫洛尼鼠白血病病毒整合酶或逆转录酶的细胞提取物进行 Pulldown 测定和共免疫沉淀，结果表明这两种酶都与 PML 蛋白相互作用。在受感染的细胞中，还观察到整合酶和 PML 之间的相互作用。 PIASy 和 SUMO 蛋白的瞬时表达促进了整合酶的 SUMO 化，但对与 PML 的相互作用没有明显影响。带有 FLAG 标签的整合酶可能与 PML 蛋白共定位于 PML 体内。通过小干扰 RNA 敲低 PML 会导致病毒 cDNA 水平和整合效率降低。这表明 PML 蛋白激活了逆转录。此外，我们发现整合酶和多梳蛋白 Pc2 之间存在直接相互作用。

项目成果

トランスジェニックニワトリ作製のための新規DNA導入法の開発

开发一种新的DNA导入方法来生产转基因鸡

• 发表时间: 2012
• 作者: Ishida;S.;Sato;F.;Endo;T.;三宅克英 ・金岡英徳・西島謙一・飯島信司
• 通讯作者: 三宅克英 ・金岡英徳・西島謙一・飯島信司

Chiken oviduct-specific expression of transgene by a hybrid ovalbumin enhancer and the Tet expression system

通过混合卵清蛋白增强子和 Tet 表达系统对转基因进行鸡输卵管特异性表达

• 发表时间: 2012
• 期刊: J. Biosci. Bioeng
• 作者: D. Kodama;D. Nishimiya;K. Nishijima;Y. Okino;Y. Inayoshi;Y. Kojima;K. Ono;M. Motono;K. Miyake;Y. Kawabe;K. Kyogoku;T. Yamashita;M. Kamihira;and S. Iijima.
• 通讯作者: and S. Iijima.

レトロウイルスのゲノムインテグレーションメカニズムの解析

逆转录病毒基因组整合机制分析

• 发表时间: 2010
• 作者: 三宅克英;沖野雄気;稲吉勇仁;水谷昭文;西島謙一;飯島信司
• 通讯作者: 飯島信司

Moloney murine leukemia virus integrase and reverse transcriptase interact with PML proteins

莫洛尼鼠白血病病毒整合酶和逆转录酶与 PML 蛋白相互作用

• 发表时间: 2012
• 期刊: J. Biochem
• 作者: Y. Okino;Y. Inayoshi;Y. Kojima;S.Kidani;H. Kaneoka;A. Honkawa;K. Nishijima;K. Miyake;and S. Iijima
• 通讯作者: and S. Iijima

ニワトリ卵白蛋白質におけるN結合型糖鎖付加能の解析

鸡蛋清蛋白N联糖基化能力分析

• 发表时间: 2011
• 作者: 西島謙一;水谷昭文;元野誠;綱島裕之;山田裕貴;三宅克英;飯島信司
• 通讯作者: 飯島信司