異種タンパク質を高生産する麹菌の分子育種

米曲霉的分子育种以生产高水平的异源蛋白质

• 批准号: 22780061
• 负责人: 尹 載宇
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22780061/
• 关键词: Aspergillus oryzae; Vacuolar protein sorting; bovine chymosin; human lysozyme

本研究では、有用な異種タンパク質を高効率で高生産する麹菌Aspergillus oryzaeの分子育種を目指している。そのため、麹菌の液胞タンパク質ソーティングレセプター遺伝子Aovps10に焦点を合わせ、その機能解析及びAovps10遺伝子単独破壊もしくは多種のプロテアーゼ遺伝子との同時破壊による異種タンパク質生産の相乗効果を検討する。また、異種タンパク質分解に関与する液胞局在プロテアーゼ遺伝子の探索をすると共にAoVps10の分子機構について明らかにする。まず、平成22年度では液胞タンパク質のソーティング機構の異種タンパク質の分泌生産における役割を明らかにするためにAovps10遺伝子の機能解析、異種タンパク質の輸送分泌の観察またAovps10遺伝子破壊による異種タンパク質生産効果の検討を行った。その結果、Aovps10遺伝子破壊株では培養4日目にウシキモシンの生産量はコントロール株に対し、約3倍に生産量が増加した。さらに、ヒトリゾチーム発現遺伝子導入株の培地上清のヒトリゾチーム活性を測定したところ、コントロール株に対し、約2倍に生産量が増加した。これらの結果は、ウシキモシンやヒトリゾチームの生産において、ゴルジ体においてこれらのタンパク質の一部はAoVps10依存的に液胞に運ばれ分解を受けていることを示唆している。また本年度の研究からAovps10遺伝子単独破壊により、プロテアーゼ5重破壊株とほぼ同等の生産性を示すこと、また、生産されたウシキモシンのウエスタン解析から、正常なフォールディングをとっているウシキモシンが生産されていることも確認している。

This study で は, useful な heterogeneous タ ン パ ク を high quality working rate high で す production る 麹 fungus Aspergillus oryzae の molecular breeding を refers し て い る. そ の た め, 麹 bacteria の vacuole タ ン パ ク qualitative ソ ー テ ィ ン グ レ セ プ タ ー posthumous son 伝 Aovps10 に focus を close わ せ, そ の function parsing and び Aovps10 posthumous son 伝 単 alone the broken 壊 も し く は multiple の プ ロ テ ア ー ゼ posthumous son 伝 と の and broken 壊 に よ る heterogeneous タ ン パ ク mass production の 乗 unseen fruit を beg す 検 る. ま た, heterogeneous タ ン パ ク qualitative decomposition に masato and す る vacuole bureau in プ ロ テ ア ー ゼ posthumous son 伝 の explore を す る と altogether に AoVps10 の molecular institutions に つ い て Ming ら か に す る. ま ず, pp.47-53 22 year で は vacuole タ ン パ ク qualitative の ソ ー テ ィ ン グ institutions の heterogeneous タ ン パ ク mass production に の secretion お け る "を cut Ming ら か に す る た め に Aovps10 heritage 伝 の function parsing, heterogeneous タ ン パ ク qualitative の conveying secretion の 観 examine ま た Aovps10 heritage 伝 son broken 壊 に よ る heterogeneous タ ン パ ク unseen mass production fruit の 検 for を line Youdaoplaceholder0. そ の results, Aovps10 but 伝 broken 壊 strains で は training 4 mesh に ウ シ キ モ シ ン の production は コ ン ト ロ ー ル strains に し seaborne, about 3 times に が raised quantity add し た. さ ら に, ヒ ト リ ゾ チ ー ム 発 now dropped 伝 son import strains の pei qing の ヒ ト リ ゾ チ ー ム determination of active を し た と こ ろ, コ ン ト ロ ー ル strains に し seaborne, about 2 times に が raised quantity add し た. こ れ ら の results は, ウ シ キ モ シ ン や ヒ ト リ ゾ チ ー ム の production に お い て, ゴ ル ジ body に お い て こ れ ら の タ ン パ ク qualitative の a は AoVps10 dependent に vacuole に luck ば を れ decomposition by け て い る こ と を in stopping し て い る. ま た の research this year か ら Aovps10 posthumous son 伝 単 alone the broken 壊 に よ り, プ ロ テ ア ー ゼ 5 weight break 壊 plant と ほ ぼ equal の productive を shown す こ と, ま た, production さ れ た ウ シ キ モ シ ン の ウ エ ス タ ン parsing か ら, normal な フ ォ ー ル デ ィ ン グ を と っ て い る ウ シ キ モ シ ン が production さ れ て い る こ と も confirm し て い る.

项目成果

Enhanced Production and Secretion of Heterologous Proteins by the Filamentous Fungus Aspergillus oryzae via Disruption of Vacuolar Protein Sorting Receptor Gene Aovps10

• DOI: 10.1128/aem.03087-09
• 发表时间: 2010-07
• 期刊: Applied and Environmental Microbiology
• 影响因子: 4.4
• 作者: Jaewoo Yoon;Tuerxun Aishan;J. Maruyama;K. Kitamoto