Structural and functional analysis of zinc finger protein in metal binding and redox reaction

锌指蛋白在金属结合和氧化还原反应中的结构和功能分析

• 批准号: 23510266
• 负责人: NEGI SHIGERU
• 金额: $ 3.58万
• 依托单位: Doshisha Women's College of Liberal Arts
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23510266/
• 关键词: 亜鉛フィンガー; 転写因子; 金属結合; DAN結合; レドックス; SELEX法; タンパク質工学; 蛋白質; DNA; 人工蛋白質; 人工ヌクレアーゼ; 酸化還元; 金属イオン; DNA結合; シグナル伝達; レドックスセンサー; 金属置換; 細胞移行; 分子進化実験; レドックス挙動; ＤＮＡ結合; 無細胞系タンパク質発現

In this study, we tried to create metallo fingerwith Co(II) and Ni(II) to investigate its metal-binding and secondary structure, DNA-binding property and oxidation reactivity using GAGA zinc finger protein (GAGA Zf). From UV and CD data,metallo fingers have almost similar coordinate and secondary structure as wild-type GAGA Zf. In DNA-binding assay using gel shift method, metallo finger can bind to cognate DNA sequence (GAGAG). From SELEX experiment, metal-substitution has no effect on the DNA sequence selectivity. Finally, we tried to study the oxidation reactivity metallo finger. As a result of an oxidation reaction with the diamide, reactivity became the following order, that is, apo>Ni(II)>>Co(II)>Zn(II) indicating that reactivity strongly depended on the metal ion. Probably, this reactive difference caused by the difference in stability of coordinate bond and domain structure among metallo fingers.

在本研究中，我们尝试与Co(II)和Ni(II)形成金属指，利用GagA锌指蛋白(Gaga ZF)研究其金属结合和二级结构、DNA结合性质和氧化反应活性。从UV和CD数据来看，金属指与野生型Gaga ZF具有几乎相似的坐标和二级结构。在凝胶移动法的DNA结合实验中，金属指可以与同源DNA序列(GAGAG)结合。SELEX实验表明，金属取代对DNA序列的选择性没有影响。最后，我们尝试研究了金属指的氧化反应活性。由于与联胺的氧化反应，反应活性变为如下顺序，即apo&gt；Ni(Ii)&gt；Co(Ii)&gt；Zn(Ii)，表明反应活性强烈依赖于金属离子。这种反应性差异可能是由于金属指之间配位键的稳定性和磁区结构的不同造成的。

项目成果

同志社女子大学 研究者データベース

同志社女子大学研究员数据库

An Arginine Residue Instead of a Conserved Leucine Residue in the Recognition Helix of the Finger 3 of Zif268 Stabilizes the Domain Structure and Mediates DNA Binding

• DOI: 10.1021/bi200697p
• 发表时间: 2011-07-19
• 期刊: BIOCHEMISTRY
• 影响因子: 2.9
• 作者: Negi, Shigeru;Imanishi, Miki;Sugiura, Yukio
• 通讯作者: Sugiura, Yukio

GAGA metallo finger peptides; Its metal-binding, DNA-binding and Redox properties

GAGA金属指肽；

• 发表时间: 2013
• 作者: Shigeru Negi;Sugiura Yukio
• 通讯作者: Sugiura Yukio

Control of DNA Binding of Transcription Factors by an Porphyrin-Cyclodextrin Supramolecular Complex

卟啉-环糊精超分子复合物对转录因子 DNA 结合的控制

• 发表时间: 2012
• 作者: S. Negi;T. Ogasawara;H. Iede;Y. Sugiura
• 通讯作者: Y. Sugiura

Redesign strategy to create of artificial zinc finger proteins

重新设计策略来制造人工锌指蛋白

• 发表时间: 2011
• 作者: Matsunaga F;Sakai A;Mochizuki S;Minami K;Inatsu S.;西森歩・仮谷典子・市川善康;SHIGERU NEGI
• 通讯作者: SHIGERU NEGI