水溶性ペリレン誘導体を主骨格とする蛍光プローブの開発と細胞内イメージングへの応用

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蛍光を利用した分析法は、操作が簡便であり選択性にも優れた分析法である。蛍光センサープローブは生体分子の挙動解析において極めて有用なツールであり近年広く研究が行われている。蛍光センサープローブの開発において、蛍光基の選択はセンサー自体の性能を左右する問題である。ペリレンビスイミドは従来、材料分野で主に用いられてきた蛍光化合物であるが、ペリレンビスイミドの優れた蛍光特性は、蛍光センサーの主骨格としても有用であると考えられる。この優れた蛍光特性は、マイクロフロー分析システムを用いた微量のアスコルビン酸の検出においても有用であることが期待できる。特にアスコルビン酸は生体内神経伝達物質であり、採取可能試料量が限られていること、またタンパク質などの高分子量のマトリックス中に存在することから、マイクロダイアリシス試料採取法とマイクロフロー分析法はアスコルビン酸の分析には適した方法と言える。そこで本年度の研究では、マイクロチップを用いたフローシステムを構築し、マイクロダイアリシス法を組み合わせることにより、複雑なマトリックス中におけるアスコルビン酸の蛍光検出を目指した。マイクロチップ上に作製したマイクロ流路に試薬溶液を送液し、アスコルビン酸との反応で生じた蛍光を共焦点蛍光顕微鏡で観察し、流路内での流れ挙動を調べた。その結果、流路深さ方向の中央の位置に顕微鏡の焦点を合わせることにより、流路壁面に吸着した試薬からの蛍光の影響を受けることなく、アスコルビン酸との反応で生じた蛍光を検出できることを明らかにした。さらに、マイクロチップへの試料導入法としてマイクロダイアリシスプローブを用いた試料採取法を組み合わせることにより、高分子量物質を含む試料からの微量試料の採取に応用可能なことを示している。以上の結果から、本検出法は微量のアスコルビン酸の検出においても有用であることが期待できる。