ニワトリ生殖系列幹細胞の増殖・分化を制御する因子の分子プロファイリング

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本年度はニワトリ始原生殖細胞(PGC)で発現が確認されている神経細胞増殖因子chicken neuron-derived neurotrophic factor (cNENF)がニワトリPGCの増殖に及ぼす影響に着目して研究を行った。昨年度までの時点で得られた結果からPGCの増殖が抗cNENF中和抗体の添加により有意に抑制される一方で、リコンビナントcNENFタンパク質を10nM添加した場合にはその増殖が有意に促進されるということが明らかとなった。今年度は培養系において増殖したPGCの単離および単離した細胞集団におけるPGCマーカー遺伝子の発現に重点を置き研究を進めた。PGCの単離についてはMACSと呼ばれる磁気を利用して細胞を単離する装置を用いることでPGCを効率的に単離することが可能であることが明らかとなった。PGCの標識には未分化細胞の表面抗原であるSSEA-1を用いた。MACSにより単離した細胞集団よりmRNAを抽出し、生殖細胞マーカーであるDdx4、Dnd1、Daz1、未分化細胞マーカーであるNanog、Oct4の発現を調べたところいずれの遺伝子もこの細胞集団において発現していることが明らかとなった。これらの結果よりcNENFを用いて増殖させた細胞集団中に多くのPGCが含まれているということを裏付けることができた。また、このことはニワトリ生体内からは大量に得ることが困難な重要資源であるPGCをその性質を維持しつつ大量に増殖させるためにcNENFが重要な役割を果たしている可能性を示唆していると考えられる。