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ヌクレオイド構成タンパク質　ＨＵ　を手がかりとした核様体システムの解明

使用类核成分蛋白 HU 阐明类核系统

基本信息

批准号：
11J02010
负责人：
西田優也
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2013
项目状态：
已结题

项目摘要

高度好熱菌 T. thermophilus HB8 (TtHB8)由来のヌクレオイド構成タンパク質HU (TtHU)の機能解析を行った。1. TtHUの相互作用因子との解析から、TtHUの機能解析を試みた。TtHUに対するpull-down assayの結果から同定されたRNA分解酵素の精製標品とTtHUの精製標品を用いてより詳細な相互作用解析を行った結果、TtHUといくつかのRNA分解酵素との相互作用を支持する結果を得ていた。ここでは、それらのRNA分解酵素の活性に対するHUの影響を調べ、RNAに対するHUの結合が、種々のRNA分解酵素の活性を阻害することがわかった。これまで、HUとRNA分解酵素との直接的な相互作用やその意義は示されていなかったので、この結果はHUの新規な機能の発見を示唆するものである。2. TtHU欠損株の表現型の観察から、TtHUの機能の同定を行うため、熱感受性TtHUを用いた系の作製を試みた。熱感受性TtHUの作製のため、16種類の一アミノ酸変異TtHUの発現プラスミドを構築し、精製を完了していた。ここでは、それらの熱安定性の測定を行い、各変異がHUの安定性に与える影響が分かり、熱感受性TtHUの作成に成功した。そこで、熱感受性TtHUをTtHB8細胞内に戻すプラスミドを構築し、TtHUに関する熱感受性TtHB8細胞の作製を試みた結果、細胞内のTtHUがDNAとの結合により安定化されていることがわかった。この結果は、HUの細胞内での新規な機能を示唆するものである。3. TtHUの溶液中での構造学的知見からの機能解析を行うために、NMRを用いた立体構造解析を試みた。現在、13C/15NラベルのされたTtHUを得る条件の検討を行っている。

T. Thermophilus HB8 (TtHB8) is a functional component of thermophilus HB8 (TtHU). 1. Analysis of interaction factors and functions of TtHU The results of the TtHU pull-down assay are consistent with the results of the TtHU pull-down assay. This is the effect of RNA on HU binding and RNA on RNAase activity. The direct interaction between HU and RNA-decomposing enzymes has implications for the development of new functions of HU. 2. TtHU deficiency phenotype detection, TtHU function identification, thermal sensitivity TtHU application system The production of TtHU with heat sensitivity is completed in 16 different types of acid. The determination of thermal stability of HU is carried out in different ways, and the influence of HU on thermal stability and thermal sensitivity is successfully determined. TtHU and DNA binding in TtHB8 cells The result is a new regulation of cellular functions in HU. 3. THU's structural knowledge in solution, functional analysis, NMR and application of three-dimensional structural analysis Now, the 13C/15N standard is under discussion.