性ステロイドホルモンの骨作用における新規転写共役因子の遺伝的解析

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本年度の目標として掲げていた全身性Dennd2A遺伝子欠損マウスのin vivo表現型解析が完了し, 狙い通り骨組織に表現型を確認することに成功した.また, 昨年度より継続して行っている全身性Dennd2A遺伝子欠損マウスの表現型解析では, 骨組織のフェノタイプの詳細を確認することができた. 骨形態計測と破骨細胞の初代培養細胞用いて骨表現形の原因を解明することに成功し, 骨の表現型の原因の一端が明らかとなった.本年度は, 骨表現型のメカニズムを明らかにすべく, 破骨細胞の初代培養細胞を用いたin vitro解析にも挑戦した. マウスの大腿骨骨髄液から未分化な血球系マクロファージを単離し, M-CSFとRANKL刺激を加え, 破骨細胞に分化誘導した. その結果, KOマウス由来の骨髄から単離した細胞は, コントロール群と比較して成熟破骨細胞への分化が有意に減弱していることが明らかになった. この原因を確かめるため, 各分化段階の細胞からRNAを抽出し, 破骨細胞の分化マーカーの発現をリアルタイムq-PCRを用いて測定したところ, KOの分化初期段階で, 破骨細胞の分化マスターレギュレーターであるNFATc1の発現が有意に減弱することが明らかとなった.以上の結果から, Dennd2Aが破骨細胞の分化の際, NFATc1の発現を正に制御し, 破骨細胞の分化を促進することで骨量調節に寄与していることが明らかとなった. 今後は詳細な分子メカニズムに迫るために, Dennd2Aと相互作用するタンパク質群の同定, 機能解析などタンパク質実験を中心に行う必要がある.