ヒト核内受容体すべてをスクリーニング可能な万能蛍光トレーサーの開発

开发可筛查所有人类核受体的通用荧光示踪剂

• 批准号: 11J03966
• 负责人: 巣山 慶太郎
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11J03966/
• 关键词: 核内受容体; 受容体結合試験; 蛍光トレーサー; ビスフェノール

遺伝子の転写因子である核内受容体はホルモン等のリガンドが結合することによって活性化され、標的遺伝子の転写を促進する。一方、内分泌撹乱物質はこれらの核内受容体に結合して受容体応答を無秩序に誘起、あるいは遮断する。このため、ヒト核内受容体48種全てに対する特異的な結合を評価するための「受容体結合試験」の実施が必要である。受容体結合試験には標準化合物として、放射標識化合物が一般的に適用されている。一方、近年では蛍光標識化合物を用いる受容体結合試験も確立された。核内受容体に関する研究が進展するなか、最近になって、複数の受容体に結合する「非選択的リガンド」が見られるようになった。そこで、こうした化合物を結合核として蛍光標識化合物が調製できれば、多くの受容体に適用可能な万能型の受容体結合試験のトレーサーとすることができるのでは?との可能性を着想するに至った。そして、複数の核内受容体に結合するビスフェノールC(BPC)を蛍光標識した万能型トレーサー候補化合物を合成し、ERをはじめとする核内受容体の競合結合試験系の確立を試みた。前年度にはBPCを蛍光標識した7種類の蛍光プローブの合成を実施した。合成した蛍光プローブの核内受容体への結合親和性を調べたところ、ERαとERβに強く結合したが、ERRγおよびCARに対する親和性は著しく低下していた。そこでERに対する結合試験の構築を試み、メチレン数n=6のリンカーを持つプローブをトレーサーとして試験の条件設定に成就した。この試験系は非常に高感度であり、かつ専用の設備・施設を必要としない簡便性に優れた試験法として確立することができた。これは核内受容体に対する新規な内分泌撹乱化学物質探索のための簡便かつ迅速な試験法として非常に有用である。また、ERRγおよびCARに対してもプローブの改良によりこの試験を適用できる可能性が示された。

Posthumous son 伝 の planning write factor で あ る nuclear within the capacity of body は ホ ル モ ン etc. の リ ガ ン ド が combining す る こ と に よ っ て activeness さ れ, mark but 伝 の planning write を promote す る. Party, endocrine 撹 disorderly substances は こ れ ら の nuclear within the capacity of body に combining し て by let body 応 answer を chaotic に induced, あ る い は interrupt す る. こ の た め, ヒ ト nuclear by let body within 48 species of full て に す seaborne る specific な combining を review 価 す る た め の "let body combined with test" の be applied が necessary で あ る. The standard compounds of the receptor-binding test に に are と て て, and the radiolabeling compounds が are generally applicable to に and されて る る. One party, in recent years, で 蛍 蛍 photolabeled compounds を have been established された by <s:1> る acceptor binding experiments. Nuclear within the capacity of body に masato す る research が す る な か, recently に な っ て, plural の let body に combining す る "non sentaku リ ガ ン ド" が see ら れ る よ う に な っ た. を そ こ で, こ う し た compounds combined with nuclear と し て 蛍 light modulation identification compounds が で き れ ば, multiple く の by let body に may apply な universal の is let body combined with test の ト レ ー サ ー と す る こ と が で き る の で は? Youdaoplaceholder0 と possibility を consider するに to った. そ し て, plural の nuclear within the body に combining す る ビ ス フ ェ ノ ー ル C (BPC) を 蛍 light logo し た universal ト レ ー サ を ー alternate compounds synthesis し, ER を は じ め と す る nuclear within the capacity of body の competition based on test is の established を み た. In the previous year, に に BPCを蛍 light marking <s:1> た7 types of <s:1> 蛍 light プロ ブ ブ ブ ブ <s:1> synthesis を implementation た. Synthetic し た 蛍 light プ ロ ー ブ の nuclear within the capacity of body へ の combined with affinity を adjustable べ た と こ ろ, strong ER alpha と ER beta に く combining し た が, ERR, gamma お よ び CAR に す seaborne る affinity は the し く low し て い た. そ こ で ER に す seaborne る combination test の build を み, メ チ レ ン number n = 6 の リ ン カ ー を hold つ プ ロ ー ブ を ト レ ー サ ー と し て test の conditions set に achievement し た. こ の test is very に は Gao Gan degrees で あ り, か つ 専 の equipment, facilities necessary と を し な い ease に optimal れ た test method と し て establish す る こ と が で き た. こ れ は nuclear within the capacity of body に す seaborne る new rules な endocrine 撹 disorderly chemical exploration の た め の is simple か つ な quickly test method と し て very useful に で あ る. ま た, ERR, gamma お よ び CAR に し seaborne て も プ ロ ー ブ の improved に よ り こ の test を applicable で き が る possibility in さ れ た.

项目成果

蛍光標識ビスフェノールCのヒト核内受容体結合試験プローブとしての汎用性

荧光标记双酚 C 作为人类核受体结合测试探针的多功能性

• 发表时间: 2012
• 作者: Yamane Takashi.;Higuchi Hiroya.;Takahashi Akihiko. Ishimoto Masuhiro;Takashi Yamane;山根隆史;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎
• 通讯作者: 巣山 慶太郎

内分泌撹乱物質探索のための受容体結合試験に用いる新規蛍光性プローブの開発

开发用于受体结合测试的新型荧光探针以检测内分泌干扰物

• 发表时间: 2013
• 作者: Yamane Takashi.;Higuchi Hiroya.;Takahashi Akihiko. Ishimoto Masuhiro;Takashi Yamane;山根隆史;巣山 慶太郎
• 通讯作者: 巣山 慶太郎

NBD標識ビスフェノールC:新規蛍光性プローブを用いた核内受容体結合試験系の開暃

NBD标记的双酚C：使用新型荧光探针开发核受体结合测试系统

• 发表时间: 2012
• 作者: Yamane Takashi.;Higuchi Hiroya.;Takahashi Akihiko. Ishimoto Masuhiro;Takashi Yamane;山根隆史;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎
• 通讯作者: 巣山 慶太郎

核内受容体結合試験における蛍光プローブ・NBD標識ビスフェノールC

核受体结合试验中的荧光探针/NBD标记双酚C

• 发表时间: 2012
• 作者: Yamane Takashi.;Higuchi Hiroya.;Takahashi Akihiko. Ishimoto Masuhiro;Takashi Yamane;山根隆史;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎
• 通讯作者: 巣山 慶太郎

リガンド結合ポケットに遊離システインを含む核内受容体RXRに結合する化学物質の探索

寻找与核受体RXR结合的化学物质，其配体结合口袋中含有游离的半胱氨酸

• 发表时间: 2011
• 作者: Yamane Takashi.;Higuchi Hiroya.;Takahashi Akihiko. Ishimoto Masuhiro;Takashi Yamane;山根隆史;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎;巣山 慶太郎;巣山慶太郎
• 通讯作者: 巣山慶太郎