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膵癌幹細胞におけるTGF-betaの機能解析

胰腺癌干细胞中TGF-β的功能分析

基本信息

批准号：
12J03881
负责人：
王佑香梨 (星野佑香梨)
金额：
$ 1.15万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012 至 2013
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J03881/
关键词：
ヒト膵癌症例 Smad4 ALDH1A1 コロニー形成能 SMAD4 ALDH1 ChIP解析未分化性マーカー

项目摘要

本年度は①膵癌症例組織を用いたSMAD4とALDH1の発現確認、②腫瘍形成におけるALDH1A1の機能解析を行った。①これまでの研究により、膵癌細胞株において、Smad4がALDH1A1の発現を負に制御することが分かっている。従って、今年度は、ヒト膵癌症例組織(中分化型腺癌)の癌中心部と癌辺縁部をそれぞれ8病変ずつ、計16病変を用いて検討を進めた。Smad4とALDH1それぞれに対する抗体を用いて免疫組織化学染色を行ったところ、16病変中11病変に関して、Smad4とALDH1の発現に逆相関が確認できた。これは、Smad4によるALDH1の発現制御が、予後不良のヒト膵癌においても機能しており、臨床における大きな知見をもたらしたと考えられる。②ALDH1はretinalをretinoic acidに酸化する酵素であり、これまでに乳癌や胃癌などの癌幹細胞マーカーとして報告されている。しかしながら、癌細胞における機能に関しては未だ明らかでなく、本年度は膵癌におけるALDH1の機能解析に着目した。まず、膵癌細胞Panc-1にレンチウイルスを用いてshALDH1A1を導入し、恒常的にALDH1A1発現をノックダウンした細胞(Panc-1-shALDH1A1細胞)を樹立した。この細胞を用いて細胞増殖を検討したが、コントロール細胞(Panc-1-shNTC細胞)と比較して、明らかな増殖の差は確認できなかった。次に、軟寒天中にPanc-1-shNTC細胞とPanc-1-shALDH1A1細胞を培養し、二週間後のコロニー形成能を調べたところ、Panc-1-shALDH1A1細胞はほとんどコロニーを形成しないことが分かった。以上のことから、ALDH1は足場非依存的な増殖に重要な機能を有しており、膵癌細胞の造腫瘍能に深く関与することが示唆された。

This year, we conducted the identification of SMAD4 and ALDH1 in cancer tissues and the functional analysis of ALDH1A1 in tumor formation. 1. In this study, cancer cell lines and Smad4 and ALDH1A1 were isolated and controlled. The cancer center of cancer tissue (moderately differentiated adenocarcinoma) is divided into 8 diseases and 16 diseases. Smad4 and ALDH1 were detected by immunohistochemical staining and the reverse correlation between Smad4 and ALDH1 was confirmed. This is the first time that we've seen ALDH1 in the past. ALDH1 is a retinoic acid inhibitor for breast cancer. This year's analysis of ALDH1's function in cancer cells is under discussion. In addition, cancer cells Panc-1-shALDH1A1 were introduced into the cells, and cells (Panc-1-shALDH1A1 cells) were established. The cell proliferation was investigated and compared with Panc-1-shNTC cells. Panc-1-shNTC cells and Panc-1-shALDH1A1 cells were cultured in soft and cold weather. After two weeks, the formation ability of Panc-1-shALDH1A1 cells was modulated. ALDH1 has important functions in field-independent proliferation, and is deeply involved in cancer cell proliferation.