腸管幹細胞維持におけるCDKインヒビターp57の役割の解明

細胞増殖の適切な制御は生体の恒常性維持の基盤である。特に組織幹細胞では増殖サイクルからはずれた「GO期」に存在することが、幹細胞性を保つのに重要であると考えられている。しかし、組織幹細胞におけるGO期維持機構の分子実態は長い間不明であった。近年申請者のグループは、細胞周期制御因子であるCDKインヒビタ-p57が造血幹細胞及び神経幹細胞をGO期に維持し、その幹細胞性を保つことに必須であることを、遺伝学的に証明した。これがすべての組織幹細胞で適応できる一般的な通則であることを証明するために、腸管幹細胞におけるp57の重要性を明らかにすることを本研究の目的とする。本年度は以下の2点を検証した。1)真の腸管幹細胞のマーカーにp57がなり得るか。・免疫染色法によりp57の位置を定量化した。p57陽性細胞は+4をピークに+1から+16に分布していた・Bmi1陽性細胞の約30%がp57を発現していた・リアルタイムRT-PCR法により、Bmi1陽性細胞が特異的にp57を発現していることを確認した・p57のレポーターマウスとしてトランスジェニックマウスを作製し、6ライン得られた2)腸管幹細胞の維持にp57が必要か。・in vitro系として腸管のSingle cell cultureの系を立ち上げた・in vivo系として腸管特異的p57ノックアウトマウスの作成を試みた。TAM濃度や投与期間の条件を振り、Villin-CreERT2マウス、Bmi1-CreERTマウス、Mx1-Creマウスのdeletion効率が分かった

細胞増殖の適切な制御は生体の恒常性維持の基盤である。特に組織幹細胞では増殖サイクルからはずれた「GO期」に存在することが、幹細胞性を保つのに重要であると考えられている。しかし、組織幹細胞におけるGO期維持機構の分子実態は長い間不明であった。近年申請者のグループは、細胞周期制御因子であるCDKインヒビタ-p57が造血幹細胞及び神経幹細胞をGO期に維持し、その幹細胞性を保つことに必須であることを、遺伝学的に証明した。これがすべての組織幹細胞で適応できる一般的な通則であることを証明するために、腸管幹細胞におけるp57の重要性を明らかにすることを本研究の目的とする。本年度は以下の2点を検証した。1)真の腸管幹細胞のマーカーにp57がなり得るか。・免疫染色法によりp57の位置を定量化した。p57陽性細胞は+4をピークに+1から+16に分布していた・Bmi1陽性細胞の約30%がp57を発現していた・リアルタイムRT-PCR法により、Bmi1陽性細胞が特異的にp57を発現していることを確認した・p57のレポーターマウスとしてトランスジェニックマウスを作製し、6ライン得られた2)腸管幹細胞の維持にp57が必要か。・in vitro系として腸管のSingle cell cultureの系を立ち上げた・in vivo系として腸管特異的p57ノックアウトマウスの作成を試みた。TAM濃度や投与期間の条件を振り、Villin-CreERT2マウス、Bmi1-CreERTマウス、Mx1-Creマウスのdeletion効率が分かった