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哺乳類未受精卵における新規超低温保存法の開発

未受精哺乳动物卵超低温保存新方法的开发

基本信息

批准号：
12J10249
负责人：
藤原克祥
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Azabu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012 至 2013
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J10249/
关键词：
超低温保存

项目摘要

哺乳類生殖細胞の超低温保存は、効率的な遺伝資源の保存やヒト生殖補助医療への応用に重要である。未受精卵、特に成熟卵(排卵卵子)および未成熟卵(卵巣卵子)などハプロイドの細胞を保存することは、個体復元時に雄の遺伝的背景が選択できることから貴重な技術となりえる。本研究は、未受精卵の新規超低温保存法の開発を目的とし、ラット、マウスおよびブタ未受精卵について検討した。本研究により、ラット成熟卵およびマウス成熟卵・未成熟卵は卵丘細胞が付着した状態で、Ca無添加EG添加液を用いた新規超低温保存法により保存することで、体外受精後に受精能を有し、それぞれの未受精卵から作出された胚は産子への発生能を示した。ラット成熟卵において超低温保存した雌雄両配偶子における体外受精を介した個体復元は世界初であり、マウス成熟卵および未成熟卵においても本研究の成果により効率的な個体復元が可能となった。また、ブタ成熟卵においてもホスホジエステラーゼ阻害剤であるカフェインにより処理することで、ガラス化保存後に紡錘体が維持され、体外受精後の受精能が大幅に向上することが明らかとなった。さらに、AFPより安価な新規CPAであるCOOH-PLLは、マウス、ラットおよびブタ成熟卵および胚の効率的なガラス化保存法に用いることが可能であることが明らかとなった。本研究により開発された手法は、高価な設備や試薬を必要とせずにマウス、ラットおよびブタ未受精卵を超低温保存し、効率的に受精卵の作出または個体復元することが可能であり、本研究の成果は実験動物や家畜の遺伝資源の保存に特に有用であると考えられる。

Cryopreservation of mammalian reproductive cells. The rate of cryopreservation of mammalian reproductive cells is very important. Unfertilized eggs, specially mature eggs (ovulatory eggs) unfertilized eggs, specially mature eggs (ovulated eggs), unfertilized eggs, specially mature eggs (ovulated eggs), unfertilized eggs, specially mature eggs (ovulated eggs), specially mature eggs (ovulated eggs), unfertilized eggs, specially mature eggs (ovulated eggs), unfertilized eggs, specially mature eggs (ovulated eggs), unfertilized eggs, specially mature eggs (ovulatory eggs), unfertilized eggs, specially mature eggs (ovulated eggs). In this study, the new cryopreservation method of unfertilized eggs was used for the purpose of unfertilized eggs. In this study, mature eggs, mature eggs, immature eggs, cumulus cells, Ca, adding EG solution, new cryopreservation methods, in vitro fertilization, unfertilized eggs, embryos, embryos and unfertilized eggs were used. The cryopreservation of mature eggs, the cryopreservation of male and female couples, the introduction of in vitro fertilization (IVF), mature eggs, immature eggs, immature eggs, mature eggs The mature eggs were incubated, the mature eggs were protected, and the mature eggs were preserved. After in vitro fertilization (IVF), the pregnancy was significantly increased. It is possible to use the method of saving the embryo rate of mature eggs by using the new CPA rules, such as COOH-PLL, COOH-PLL, and so on. In this study, we conducted a series of experiments, such as the necessary cryopreservation of unfertilized eggs in high-level equipment, cryopreservation of unfertilized eggs, and the possibility that the fertilized eggs were stored in cryopreservation. The results of this study show that animals and livestock resources are useful for preservation.